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BHK-21细胞的常规培养方法
阅读：113 发布时间：2025-7-24在完成BHK-21细胞的常规培养后，BEL-7404人肝癌细胞的培养同样需要严格的操作规范，以确保细胞的活性和实验的可靠性。以下是针对BEL-7404细胞的培养优化建议：
1. 培养基的选择与更换
BEL-7404细胞通常在高糖DMEM培养基中生长良好，需补充10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素双抗。培养基应每2-3天更换一次，以维持充足的营养供应，避免代谢废物的积累。若细胞生长缓慢，可适当提高血清浓度至15%，但需注意避免过度增殖导致的接触抑制。
2. 细胞传代的优化
与BHK-21细胞类似，BEL-7404细胞的传代也需在80%-90%汇合度时进行。但由于肝癌细胞贴壁较紧，消化时间需适当延长，通常使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化3-5分钟，并在显微镜下观察细胞形态变化。消化后，需用含血清的培养基迅速终止反应，避免过度消化损伤细胞。离心重悬后，建议按1:2至1:3的比例分瓶接种，以保证细胞快速适应新环境。
3. 冻存与复苏的注意事项
BEL-7404细胞的冻存液通常由90% FBS和10% DMSO组成，细胞密度应调整至1×10?/mL以上。冻存时需采用梯度降温法：先置于-80℃过夜，再转移至液氮中长期保存。复苏时，需快速解冻并立即用预温培养基稀释，以降低DMSO的毒性。复苏后24小时内避免频繁观察，以减少对细胞的扰动。
4. 污染防控与质量控制
肝癌细胞对微生物污染较为敏感，需严格无菌操作。定期检测支原体，若发现污染，可使用抗生素如Plasmocin处理，或重新复苏纯净细胞。此外，建议每3-5代进行一次STR鉴定，确保细胞株的遗传稳定性。
通过上述优化措施，BEL-7404细胞可保持较高的增殖活力和实验一致性，为肝癌相关研究提供可靠模型。
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