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北京百奧創(chuàng)新科技有限公司

NEB T4 DNA連接酶使用說明書

時(shí)間:2023-6-13 閱讀:7771
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NEB T4 DNA連接酶protocol:

1、在微型離心管(冰上)中設(shè)置以下反應(yīng):

(T4 DNA連接酶應(yīng)最后添加。注意:表中顯示了使用1mol:3mol插入zhi定DNA大小的載體的連接。)


成分

20 μl 反應(yīng)

T4 DNA連接酶緩沖液 (10X)*

2 μl

載體 DNA (4 kb)

50 ng (0.020 pmol)

Insert DNA (1 kb)

37.5 ng (0.060 pmol)

無核酸酶水

to 20 μl

T4 DNA 連接酶

1 μl


**注意:T4 DNA連接酶緩沖液應(yīng)在室溫下解凍并重懸。

2、通過吸管上下輕輕混合反應(yīng)物,并短暫地進(jìn)行微量離心。

3、對于粘性(粘性)末端,在16°C下孵育過夜或室溫下孵育10分鐘。

4、對于鈍端或單堿基懸突,在16°C下孵育過夜或室溫下孵育2小時(shí)(或者,高濃度T4 DNA連接酶可用于10分鐘的連接)。

5、在65°C下加熱滅活10分鐘。

6、在冰上冷卻,將1-5μl的反應(yīng)轉(zhuǎn)化為50μl的感受態(tài)細(xì)胞。

NEB T4 DNA連接酶使用時(shí)的注意事項(xiàng):

1、ATP 是反應(yīng)中必不ke少的輔因子。這與需要 NAD 作為輔因子的 E. coli DNA 連接酶不同。

2、若需稀釋 T4 DNA 連接酶,推薦使用含 50% 甘油的貯存緩沖液(稀釋緩沖液 A,NEB #B8001S)稀釋,然后于 -20℃ 貯存。如稀釋后立即使用,也可以使用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。

3、連接反應(yīng)可以在添加 1 mM ATP 的四種限制性內(nèi)切酶緩沖液的任何一種或在 T4 多聚核苷酸激酶(T4 PNK)緩沖液中進(jìn)行。

4、室溫連接。

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NEB T4 DNA連接酶代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,成立于2017年,由經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)團(tuán)隊(duì)、商業(yè)團(tuán)隊(duì)及管理團(tuán)隊(duì)組建而成,專注于免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域核心試劑產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售基于“客戶第一"的核心理念,百奧創(chuàng)新在產(chǎn)品自主研發(fā)的同時(shí),也與全球多家生命科學(xué)試劑供應(yīng)商建立良好的合作關(guān)系,向全球10,000+客戶提供200,000+優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。百奧創(chuàng)新將以品質(zhì)樹立品牌,以服務(wù)贏得口碑,致力于成長為重要的生物化學(xué)試劑開發(fā)與成果轉(zhuǎn)化的kai tuo zhe,并成為行業(yè)ling xian的優(yōu)質(zhì)品供應(yīng)商。


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