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详细介绍
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
| 小气道平滑肌细胞 | 5×10?Cells/T25培养瓶 | GOY-01X0739 |
商品介绍：
名称 小气道平滑肌细胞 2.组织来源：小气道组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 人小气道平滑肌细胞分离自小气道组织；临床上通常将内径小于2mm的小细支气管称为小气道。小气道具有气流阻力小，但易阻塞的特点。在平静吸气时，空气进入狭窄的鼻咽部，产生涡流。由于小气道已无软骨支持，在脱离纤维鞘嵌入肺组织后，管腔通畅性不象软骨性气道，易于受胸腔的压力变化的影响。小气道上皮细胞形成连续呼吸道内层，作为隔绝外界有害物质的物理和功能屏障发挥着*的作用。小气道位于肺泡和气管的交界处，这些细胞在功能上能够调节免疫反应、产生化学因子进行宿主防御、表达粘附分子，并可能通过HLA-DR表达呈递抗原；它们还能产生液体有助于肺液的平衡。许多呼吸道疾病，如哮喘、支气管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纤维化，都涉及呼吸道表面上皮细胞的破坏；小气道上皮细胞的培养可为防止呼吸道扩增疾病和重塑提供新的治疗选择。小气道平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。小气道的生理功能特点：①小气道阻力??；②气流速度慢；③可调节控制通气与血流比例。小气管平滑肌细胞主要功能：①保持气道张力维持小气道形态；②肺小气道进行气体交换，病变可引起换气功能障碍；③炎症、痰液阻塞或当气道外压大于气道内压时容易造成小气道闭合、萎陷。小气管平滑肌细胞与主要病生理变化：①支气管炎；②肺气肿；③慢性阻塞性肺疾病。 5.方法简介： 实验室分离的人小气道平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： 实验室分离的人小气道平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H013 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传5代左右；3代以内状态最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大?。?/span>
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
TRIB2 基因全长ORF克隆
TWF2 基因全长ORF克隆
PDK3 基因全长ORF克隆
STYK1 / NOK 基因全长ORF克隆
Wnt-1 基因全长ORF克隆
RORC 转录变体1 基因全长ORF克隆
sFRP-4 基因全长ORF克隆
CLK3 基因全长ORF克隆
Smad1 基因全长ORF克隆
CDK8 基因全长ORF克隆
小气道平滑肌细胞0.78-50 ng/mL 人Disabled同系物2（Disabled homolog 2）ELISA试剂盒
78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Neurogranin
6.5%NaCl葡萄糖琼脂 英文名称：6.5% NaCl Dextrose Agar 产品规格：250g
0.156-10 ng/mL 人不典型蛋白C1orf106(Uncharacterized protein C1orf106)ELISA试剂盒
TB培养基 英文名称：TB Medium 产品规格：250g
0.312-20 ng/mL 人乳腺珠蛋白(Mammaglobin-A) ELISA试剂盒
3.12-200 ng/mL ELISA Kit for Human SPARC
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Heat shock factor protein 4
0.156-10 ng/mL 人血管生成素2(ANG-2)ELISA试剂盒
抗生素检定培养基2号（低pH） 英文名称：Antibiotic Agar NO.2 产品规格：250g
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