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預染marker高特異性的能力

閱讀:1712      發(fā)布時間:2017-8-18
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  預染marker可直接凝膠上樣,無需煮沸。條帶清晰 – 亮度類似,但顏色不同的條帶便于觀察。質(zhì)量檢測 – 每批次均經(jīng)過SDS-PAGE 和Western blotting 驗證。兩個參考條帶 – 70kDa 為橙色,10kDa 為綠色。與膜兼容 – Western blotting 時彩色條帶將轉(zhuǎn)移到膜上應用,監(jiān)測SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳期間蛋白的遷移。監(jiān)測Western blotting 蛋白轉(zhuǎn)移到膜上的情況。測定SDS 聚丙烯酰胺凝膠和Western blots 上的蛋白分子量。
 
  預染marker可提高特異性的識別能力。在做westen blot時,用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點可以降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應該封閉所有未結(jié)合位點而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的標委、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應。zui常見的封閉劑是BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20(0.05 - 0.1%)稀溶液。
  
  預染marker在電泳過程中或者轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到。預染蛋白分子量的出現(xiàn)方便了我們的實驗,這種蛋白分子量標準可以幫助我們在電泳時、電泳后,以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率——比如,已知垂直電泳*分辨區(qū)域大約在膠的2/3處,如果使用預染Marker就可以預測目標蛋白進入*分辨區(qū)時停止電泳以得到*分辨效果;如果觀察到Marker電泳異常也可以及時終止電泳;另外在Western Blot轉(zhuǎn)膜以后可以直接觀察蛋白轉(zhuǎn)膜是否*,還可以在膜上標記蛋白分子量,所以吸引了許多實驗室人員購買預染蛋白標準。

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