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背景介紹

谷胱甘肽（GSH）是細(xì)胞內(nèi)重要的抗氧化劑，其水平高低直接反映腫瘤細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)。肺癌細(xì)胞常依賴高 GSH 水平抵御放化療產(chǎn)生的活性氧（ROS），引發(fā)治療抵抗。GSH 作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 4（GPX4）的輔因子，能抑制鐵死亡，而其消耗會(huì)致使 GPX4 失活，進(jìn)而促進(jìn)鐵死亡，因此 GSH 水平變化是鐵死亡的重要標(biāo)志。動(dòng)態(tài)檢測(cè)GSH，可評(píng)估治療是否激活氧化應(yīng)激與鐵死亡通路。此外，檢測(cè) GSH 還能驗(yàn)證 GSH 響應(yīng)性藥物釋放效率，實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性激活。

谷胱甘肽檢測(cè)在治療肺癌研究中的應(yīng)用

2025年5月8日，復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院陳依婷博士等人在Journal of Nanobiotechnology（IF=10.6）期刊上發(fā)表了題為“Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitriteaugmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer"的研究論文。研究團(tuán)隊(duì)設(shè)計(jì)了一種基于多不飽和脂肪酸（PUFA）的納米反應(yīng)器 DHA-N@M，通過(guò)吸入給藥方式作用于肺部腫瘤。該納米反應(yīng)器由巨噬細(xì)胞膜包裹 DHA-SNO（一種 GSH 響應(yīng)性釋放NO的 PUFA 衍生物）構(gòu)成，兼具腫瘤靶向性與 GSH 響應(yīng)特性。實(shí)驗(yàn)顯示，DHA-N@M 可顯著提升藥物在肺腫瘤中的蓄積量，效果優(yōu)于靜脈注射。其作用機(jī)制為：通過(guò)消耗GSH、釋放NO并生成ONOO?，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞鐵死亡，與放療聯(lián)用可協(xié)同增強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)。在肺癌原位模型中，DHA-N@M 聯(lián)合放療展現(xiàn)出 93.91% 的腫瘤抑制率，且安全性良好。該研究為肺癌治療提供了一種新型吸入式納米藥物遞送系統(tǒng)，通過(guò)靶向腫瘤微環(huán)境和增強(qiáng)鐵死亡，顯著提升了放療效果，具有重要的臨床轉(zhuǎn)化潛力。

圖3 不同處理后Lewis肺癌細(xì)胞（E）NO、（F）NOS和（G）ONOO的CLSM圖像

接下來(lái)，小愛(ài)給大家詳細(xì)介紹谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒（abs580006）的使用方法。

一、試劑盒組分

二、操作步驟

1、材料和試劑準(zhǔn)備

自備材料：酶標(biāo)儀、蒸餾水、移液器與槍頭、研缽、離心機(jī)、計(jì)時(shí)器、濕冰等。

Standard：使用前將0.65 mL蒸餾水加入管中，混勻至wan全溶解；然后取0.05 mL溶液加入0.95 mL蒸餾水中混合均勻，獲得濃度為0.5 mmo/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，4°C儲(chǔ)存。

Standard：Dye Reagent：使用前加入4 mL Diluent 溶解。

2、樣本處理

（1）細(xì)胞/細(xì)菌樣本：將細(xì)胞/細(xì)菌（5×106）收集到離心管中，離心后去掉上清液，加入1mL Assay buffer，超聲處理（功率20%，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）后于4℃，8000g 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，濕冰上保存待檢測(cè)。

（2）組織樣本：稱取0.1g組織，加入1mL Assay buffer在濕冰上勻漿，4℃，8000g 離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，濕冰上保存待檢測(cè)。

（3）血清/血漿樣本：直接檢測(cè)。

3、上樣及檢測(cè)

上樣前將所有試劑加熱至37℃，然后按照如下表格加樣。

注：

（1）對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)品，可進(jìn)行2倍連續(xù)稀釋（6個(gè)點(diǎn)左右），制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）對(duì)于未知的樣品，我們建議挑選幾個(gè)樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定樣品濃度和稀釋倍數(shù)。

4、標(biāo)準(zhǔn)曲線

標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于參考，每次實(shí)驗(yàn)都必須做一條新的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

檢測(cè)范圍：0.01 mmol/L - 0.5 mmol/L

常見(jiàn)問(wèn)題解答

Q1：試劑盒中的96-Well Microplate只有一個(gè)，不夠?qū)嶒?yàn)使用怎么辦？
A1：該試劑盒中的96孔板是免費(fèi)送的，后續(xù)實(shí)驗(yàn)可以用常規(guī)的96孔酶標(biāo)板代替。

Q2：試劑盒操作說(shuō)明書中既有標(biāo)準(zhǔn)曲線法又有公式法，我應(yīng)該選擇哪種計(jì)算方式？
A2：兩種方式任選一種就可以，公式是簡(jiǎn)便算法，建議按照標(biāo)曲計(jì)算，會(huì)更加準(zhǔn)確。需要注意的是，使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法，每次實(shí)驗(yàn)必須重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Q3：反應(yīng)過(guò)程中出現(xiàn)沉淀，應(yīng)該如何處理？
A3：沉淀或絮狀物大多是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)濃度過(guò)高導(dǎo)致的，建議把樣品從孔板里吸出來(lái)離心一下取上清再去檢測(cè)，或者把樣品加到離心管里反應(yīng)離心后再取上清加到孔板里檢測(cè)。

Q4：儀器無(wú)相應(yīng)檢測(cè)波長(zhǎng)怎么辦？
A4：試劑盒里推薦的檢測(cè)波長(zhǎng)如果儀器設(shè)置里沒(méi)有，可以在說(shuō)明書推薦檢測(cè)波長(zhǎng)附近找，在±10nm以內(nèi)一般是沒(méi)有問(wèn)題的。

參考文獻(xiàn):
[1]Chen Y, Huang X, Hu R, et al. Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite-augmented ferroptosis potentiate radiotherapy in lung cancer. J Nanobiotechnology. 2025;23(1):338. Published 2025 May 8. doi:10.1186/s12951-025-03409-8

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