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蛋白酶K具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用

閱讀:2043      發(fā)布時間:2021-8-29
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  蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶。在pH4到pH12的條件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定。蛋白酶K常用于提取mRNA、基因組DNA,或用于從各種細(xì)胞中提純DNA和RNA時消化雜蛋白。還可用于糖蛋白的修飾,以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究等方面。
  蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛,它可以消化包圍靶DNA蛋白,因此使用羅氏蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結(jié)合的機會增強雜交信號,但在使用羅氏蛋白酶K時要注意使用的濃度,過高或者過低都會破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、核消失等影響試驗結(jié)果。
  蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果。
  蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果。

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