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介紹蛋白酶K的使用方法

閱讀:4153      發(fā)布時間:2021-7-26
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  蛋白酶K(ProteinaseK),來源于林伯氏白色念球菌(TritirachiumalbumLimber)的蛋白酶K基因,屬于絲氨酸蛋白酶類,具有*的酶活性和廣泛的底物特異性。
  蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的樣品處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,能增加探針與靶核酸結(jié)合的機會,提高雜交信號。但蛋白酶K的濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片的脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達(dá)到理想的染色效果。
  介紹蛋白酶K的使用方法:
  1.配制蛋白酶K溶液:一般以20mg/ml濃度配制蛋白酶K溶液。將200mg的蛋白酶K加入到9.5mldd水中,輕輕搖動,直至蛋白酶K*溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
  2.根據(jù)終濃度50—100µg/ml,吸取適量蛋白酶K溶液,到待消化樣品中,孵育溫度為55至65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時間為15分鐘至48小時;理想孵育時間為2小時。推薦反應(yīng)緩沖液:50mMTris-HCl(pH7.5),10mMCaCl2。

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