免疫印跡試驗（Western blot）是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法，被廣泛應用于蛋白表達水平的研究、抗體活性檢測和早期疾病診斷等多個方面。其中較為簡單也為大家所普遍接受的Western blot顯色方法為底物化學發(fā)光法ECL。
*，Western blot的原理是蛋白質在電力場的作用下，由大到小的進行排列，利用電泳進行分離和富集。擁有抗原表位的蛋白質分子被抗體（一抗）特異性識別并與之結合。在此基礎上，酶或熒光標記的二抗識別并結合一抗，通過與底物反應顯色來觀察目的蛋白。
Western blot顯色的方法主要有以下幾種：
一、放射自顯影；
二、 底物化學發(fā)光ECL；
三、底物熒光ECF；
四、底物DAB呈色。
現(xiàn)常用的有底物化學發(fā)光ECL和底物DAB呈色。大部分Western blot顯色底物是化學發(fā)光底物，發(fā)表文章通常也是用底物化學發(fā)光ECL。
ECL法檢測辣根過氧化物酶的原理是辣根過氧化物酶在H2O2存在下，氧化化學發(fā)光物質魯米諾（lumino，氨基苯二酰一肼）并發(fā)光，在化學增強劑存在下光強度可以增大1000倍，通過將印記放在照相底片上感光就可以檢測辣根過氧化物酶的存在。ECL法操作簡便，應用現(xiàn)成的試劑盒(abs920)，按照說明，將兩種顯色底物等體積混合后將其覆蓋在膜表面使其均勻，用玻璃膠片把膜包起來，馬上在暗室中將X光片覆蓋在膜的上面，顯影、定影（或用熒光檢測儀檢測）。ECL法具有靈敏度高，線性范圍廣等特點。
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