產(chǎn)品名稱：ATP-檸檬酸裂解酶（ACL）測試盒說明書

規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣

測試方法:微量法、紫外分光光度法

貨號(hào)：YS-01S6491

測定意義

ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶，其催化產(chǎn)生的乙酰輔酶可用于脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質(zhì)合成、氨基酸合成等。

測定原理：

ACL在ATP和輔酶存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm測定NADH減少速率，計(jì)算ACL活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細(xì)閱讀購買說明！

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡便、快速

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

Anti-P27/kip1 /FITC 熒光素標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

rec Protein A/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的重組蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1抗體 CKIP-1 0.1ml

Rabbit Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml

Phospho-FoxO1 (Ser319) 英文名稱： 磷酸化叉頭蛋白家族1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Pin1 肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體 規(guī)格 0.1ml

rec Protein A/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的重組蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

phospho-heterochromatin protein 1 (pTyr41)peptide 異染色質(zhì)蛋白1(磷酸化多肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-ABCD1/CCL22 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Jun(Ser243) 磷酸化原癌基因c-Jun抗體 規(guī)格 0.1ml

兔抗猴IgG血清 0.5ml 國產(chǎn)

WNT5A 英文名稱： 信號(hào)通路Wnt5a抗體 0.1ml

Phospho-DBC1 (Tyr454) 英文名稱： 磷酸化膀胱癌缺失基因1抗體 0.1ml

Anti-ABCD1/CCL22 嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白22抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

TRIM21 英文名稱： 核糖核蛋白抗原抗體 0.2ml

EID1 英文名稱： 乙?；D(zhuǎn)移酶EID1抗體 0.2ml

CD7抗體 Anti-CD7 0.1ml

Anti-VEGF-D/FIGF/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠血管內(nèi)皮生長因子D型VEGFD抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GPS1/CSN1(Ser474) 磷酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

Cdc2/P34CDC2/CDK1(Cell division control protein 2) 周期素依賴激酶1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
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