PCR反应鉴定——PCR反应条件:

【产品名称】岛青霉探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Penicillium islandicum
【产品编号】YSP7062
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测，所用仪器为实时荧光PCR仪，可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针，通过实时荧光一步法RT-PCR（Taqman探针法）对鸭源性成分核酸进行定性检测。
*的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板，扩增β-actin基因，与同类产品相比，UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强，扩增效率更高。
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PCR实验方法步骤：
岛青霉探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
实验步骤：
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
βSitosterol型肝炎病毒X蛋白相互作用蛋白检测试剂盒10mg

 趋化因子C-C-基元配体3样蛋白1(CCL3L1)重组蛋白英文名称：Recombinant Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1)

Ⅲ型胶原(COL3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 DPYS / Dihydropyrimidinase 蛋白*250(g)

DUTP(Human deoxyuridinetriphate) ELISA Kit  人脱氧尿三CAS号：102767282 α生育酚转运蛋白检测试盒50mgHuman/人Elisa试盒37022

Madecassic acid型肝炎病毒X抗原检测试剂盒20mg

金雀花碱,野靛碱（标准品） 质量规格：HPLC≥98%,标准品 Cytisine

Shikonin阿立唑杂质B标准品规格：规格：人多药耐药蛋白3(MDR3)ELISA试剂盒 0.2ml

人FractalkineELL  聚合酶延伸子抗体规格:96T/48TArticaine Related Compound A规格:125mgPTEN;MMAC1检测试盒10mg人脑微血管内皮细胞，HBMEC细胞1x10^6cells

98%500g5gL氨基化酶Protein S100A10

硫乙醇盐流体对照培养基  英文名称：Fluid thioglycollate control medium   保存：-20℃   规格：11.9g/400mL 化丝裂原活化蛋白激酶激酶2抗体  

全胃蛋白胨BRVI型胶原蛋白检测试盒20mg谷胱甘肽过氧化酶检测试盒Osteoprotegerin

98%25g25gDα氨基化酶vasopeptidase inhibitors

三十六(standard for GC,≥98.0%(GC)) 质量规格：standard for GC,≥98.0%(GC) Hexatriacontane 萋-泥氏染色液/Ziehl-Neelsen Strain细菌耐染色液10毫升×3支国产/进口

Lambda BrothBRV型胶原蛋白检测试盒20mg骨保护素检测试盒Bonemorphogeneticprotein2

98%100g100g葡萄糖化酶Adenylate Cyclase 4

SGI-1776 质量规格：>98%,Pim1抑制剂 SGI-1776；SGI1776 白色绿僵菌 Metarhizium album香菇 Lentinula edodes

Gelatin PeptoneBR角膜蛋白多糖检测试盒20mg骨成型蛋白2检测试盒Bonemorphogeneticprotein4
岛青霉探针法荧光定量PCR试剂盒维生素B12 CAS号： 68199 规格： HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

维生素B1 CAS号： CAS:67038 规格： HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

维生素A CAS号： 302794 规格： HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

维生素A醋 CAS号： 127479 规格： HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

脱水羊藿素 CAS号： 118525409 规格： HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

脱水穿心莲内琥珀半 CAS号： 786593064 规格： HPLC≥99%;20mg 订购|咨询

L天冬酰 CAS号： 70473 规格： HPLC≥98%;200mg 订购|咨询

L天冬氨 CAS号： 56848 规格： HPLC≥99%;200mg 订购|咨询

L苏氨 CAS号： 72195 规格： HPLC≥98%;200mg 订购|咨询

L丝氨 CAS号： 56451 规格： HPLC≥98%;200mg 订购|咨询

L色氨 CAS号： 73223 规格： HPLC≥98%;200mg 订购|咨询

L鼠李糖 CAS号： 10030850 规格： HPLC≥98%;100mg 订购|咨询

茄尼 CAS号： 13190971 规格： HPLC≥97%;20mg 订购|咨询

千层纸素 CAS号： 480115 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

10羟癸 CAS号： 1679534 规格： HPLC≥96%;20mg 订购|咨询