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核苷酸还原酶M1(RRM1)重组蛋白

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品       牌其他品牌

厂商性质经销商

所  在  地上海市

更新时间:2023-03-22 09:44:20浏览次数:276次

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供货周期 现货 应用领域 化工,生物产业
主要用途 仅供科研研究实验 英文名称 Recombinant Ribonucleotide Reductase M1 (RRM1)
物种 Homo sapiens (Human,人) 规格 10μg50μg200μg1mg5mg
品牌 研生
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公司产品仅供科研使用,不得用于临床!

产品名称

英文名称

物种

核苷酸还原酶M1(RRM1)重组蛋白

Recombinant Ribonucleotide Reductase M1 (RRM1)

Homo sapiens (Human,人)

商品介绍:

R1; RIR1; RR1; Ribonucleoside-diphosphate reductase large subunit

酶与激酶

物种:Homo sapiens (Human,人)

来源:原核表达

宿主E.coli

内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)

亚细胞定位::细胞质

预测分子量:28.0kDa

实际分子量:28kDa(差异分析请参阅说明书)

片段与标签:Met1~Pro213 with N-terminal His Tag

缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)

性状:冻干粉

纯度:> 97%

等电点:8.8

应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

规格10μg50μg200μg1mg5mg   

蛋白表达及纯化:

1.培养500ml哺乳动物细胞,然后将重组质粒转染到细胞中,通过瞬时表达产生目标蛋白。

2.收集含有目标蛋白的部分(细胞或培养上清)。

3.通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

图片5.png

图片1.png


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注意事项:

1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。

2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。

3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。

4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作                                            

操作步骤:

Ⅰ 实体组织蛋白的提取

1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。

2.  每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;

3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;

4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);

5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取

1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;

2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;

3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。

4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:

细胞数量

Lysis Buffer加入量

107个

0.5 mL~1 mL

5×106个

0.2 mL~0.5 mL

5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;

6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);

7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

KRT33A产品名称: 毛发角蛋白33A抗体交叉反应: Human, Mouse

Orai1产品名称: 嗅觉受体ai1抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

CDX2产品名称: 尾型同源盒转录因子2抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

SLC29A4产品名称: 脑质膜单胺转运蛋白PMAT抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit

KIAA0319L产品名称: 相关蛋白1抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Horse

phospho-Gli1 (T101/ S102/S104)产品名称: 脑胶质相关蛋白抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

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