提取外周血淋巴細胞時需要注意的事項

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如果取外周血淋巴細胞 (PBMC) 進行ELISPOT檢測，采用新鮮血液。在保證無菌操作的前提下，首先應(yīng)保證取血時抗凝劑應(yīng)及時充分的與血液混勻，避免血凝塊的出現(xiàn)。抗凝血及時提取PBMC，避免放置時間過長，室溫下避免夜。應(yīng)選用分離效果好的淋巴細胞分離液，避免PBMC中混有過多其他細胞成分或雜質(zhì)。

外周血出現(xiàn)溶血后，在使用淋巴細胞分離液分離PBMC時，溶血產(chǎn)生的細胞碎片、血紅素等雜質(zhì)將極大可能懸浮于分離液的層面，在吸取PBMC時非常容易混入這些雜質(zhì)，由于混入細胞的細胞碎片和血紅素很難清洗去除，在進行Elispot實驗時，有可能沉積在培養(yǎng)板底，嚴重影響細胞因子和抗體的結(jié)合，進而影響實驗結(jié)果。

使用淋巴細胞分離液，推薦使用進口淋巴細胞分離液，如：Lymphoprep，或者NycoPrep 1.077（無寡糖）。避免使用紅細胞裂解液分離淋巴細胞。

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