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原代細(xì)胞污染的來源

時間:2017/9/30閱讀:1379
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凡混入原代細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染,細(xì)胞污染不能*被消除,但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。細(xì)胞污染根據(jù)污染源主要可以分為物理性,化學(xué)性和生物性污染。

物理性污染的來源、危害及預(yù)防:物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染。物理性污染通過影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中的生化成分,從而影響細(xì)胞的代謝。培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素,如溫 度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。細(xì)胞、培養(yǎng)液或其它培養(yǎng)試劑暴露于放射線、輻射或過冷過熱的溫度中,可以引起細(xì)胞代謝發(fā)生改變,如細(xì)胞同步化、細(xì)胞生長受抑制甚至細(xì)胞死亡。通過實驗室 的合理設(shè)計及建立規(guī)范的操作規(guī)程,可以減少環(huán)境中物理因素對細(xì)胞的影響。孵箱應(yīng)放在溫度較恒定的環(huán)境中,周圍不能放置能引起機(jī)械振動的設(shè)備,如離心機(jī)。培養(yǎng)液及培養(yǎng)試劑應(yīng)放在固定的位置,為避免光照試劑不能放在玻璃門的冰箱中,試劑周圍不能放同位素。培養(yǎng)液從冰箱中取出后應(yīng)在室溫中放置一段時間后再進(jìn)行實驗,以避免過冷的溫度對細(xì)胞的影響。

化學(xué)性污染的來源、危害及預(yù)防 :培養(yǎng)環(huán)境中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞的污染 。化學(xué)物質(zhì)并不總是抑制細(xì)胞的生長,某些化學(xué)物質(zhì)如激素就可促進(jìn)細(xì)胞的生長。不同細(xì)胞對化學(xué)物質(zhì)污染的反應(yīng)是不一樣的。未純化的物質(zhì)、試劑、水、血清、生 長輔助因子及儲存試劑的容器都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)的必需養(yǎng)分,如氨基酸,若濃度超過了合適的范圍,也會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性。同樣,不同細(xì)胞系 其*培養(yǎng)條件下對血清和緩沖液的要求是不一樣的,在培養(yǎng)中應(yīng)嚴(yán)格控制。玻璃制品清洗過程中殘留的變性劑或肥皂(通常殘留在瓶蓋的內(nèi)表面)是zui常見的化學(xué)性污染。水是*一種在凝固時 膨脹的化合物。因此在選擇凍存細(xì)胞的容器時應(yīng)考慮到這個因素。容器因水的膨脹而發(fā)生破裂是引起試劑污染的重要原因。為了避免金屬離子、有機(jī)分子、細(xì)胞內(nèi)毒素等物質(zhì)對水的污染,在配制液體,清洗容器時必須使用不含雜質(zhì)的超純水 。需要注意的是,超純水放置過久其純度會下降。在高壓蒸氣滅菌及蒸餾水時水經(jīng)常被污染,因為高壓蒸氣鍋及純水機(jī)的常規(guī)維護(hù)后可能有少量的化學(xué)物質(zhì)殘留。為 了保證水的純度,我們應(yīng)采取措施盡量避免化學(xué)物質(zhì)的殘留。動物血清是原代細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,但血清又是潛在的生物及化學(xué)污染的來源。由于血清采集于多個動物,而且不同的工藝及質(zhì)量各不相同,因此血 清中許多成分的濃度存在很大的變異。血清對不同細(xì)胞的促生長能力及毒副作用取決于這些細(xì)胞的分化功能、組織來源及培養(yǎng)基的成分等因素。在進(jìn)行一系列實驗 時,為了保證實驗的可重復(fù)性,選用同一批次的血清。培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑 培養(yǎng)液、培養(yǎng)附加成分、試劑都可能成為化學(xué)性污染的來源。細(xì)胞培養(yǎng)使用的所有物質(zhì)都應(yīng)是高純度的,并經(jīng)過機(jī)構(gòu)的鑒定,實驗者本人也應(yīng)對上述成分進(jìn)行 純度鑒定。同時,正確配置和儲存培養(yǎng)液及試劑也是非常重要的,應(yīng)該采取標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟,避免液體體積計算錯誤,混用類似化合物等錯誤。
含量測定    丙酸睪酮    對照品    100008-199404        50mg
含量測定    醋酸氟輕松    對照品    100010-200507        50mg
鑒別    醋酸氯地孕酮    對照品    100011-198501        50mg
含量測定    醋酸潑尼松    對照品    100012-200105        100mg
UV法含量測定用    地高辛    對照品    100015-200308        30mg
含量測定    地塞米松磷酸鈉    對照品    100016-20011A        100mg
含量測定    氨苯甲酸    對照品    100017-200308        50mg
檢查    對乙酰氨基酚    對照品    100018-200408        1000mg
原代細(xì)胞

 

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