蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告。可按客戶要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱(chēng)：Recombinant Sphingosine Kinase 2 (SPHK2)

酶與激酶

型號(hào)：GOY-01D2507

物種：Homo sapiens (Human，人)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：n/a

預(yù)測(cè)分子量：24.3kDa

實(shí)際分子量：-(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))

片段與標(biāo)簽：Met1~Asn188 with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點(diǎn)：-

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

D-天冬氧化酶(DDO)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant D-Aspartate Oxidase (DDO)DASOX; DDO-1; DDO-2物種：Human，人

二肽酶1(DPEP1)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Dipeptidase 1, Renal (DPEP1)RDP; MBD1; MDP; Dehydropeptidase-I; Microsomal dipeptidase; Renal dipeptidase物種：Human，人

溶血磷脂酶Ⅲ(LYPLA3)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Lysophospholipase III (LYPLA3)PLA2G15; ACS; LLPL; LPLA2; GXVPLA2; Lysosomal Phospholipase A2; Group XV Phospholipase A2; 1-O-acylceramide synthase; LCAT-like lysophospholipase物種：Human，人

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基G1(發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細(xì)胞)

醋谷/乙酰谷酰（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定 Aceglutamide

 釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae泡盛曲霉 Aspergillus awamori

（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：鑒別 Montmorillonit

 EB-3(人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞)人腺腺細(xì)胞

鹽（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定 Ropivacaine hydrochloride

 大腸桿菌 Escherichia coli棉鈴蟲(chóng)擬青霉

佛手柑素;香檸檬素;佛手柑亭;香檸檬亭（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Bergamottin

 酒假絲酵母 Candida kefyrMiaPaCa-2, 人胰腺細(xì)胞

番石榴苷（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Guaijaverin

 豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

他濱（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 Emtricitabine

 MKN45(人胃細(xì)胞)香菇 Lentinula edodes

他濱 質(zhì)量規(guī)格：>99%,核苷逆轉(zhuǎn)錄酶(NRTI)抑制劑 Emtricitabine

 地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformisC6(大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞)

肌酐（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：供檢查用 Creatinine

鞘氨醇激酶2(SPHK2)重組蛋白人100mL CAPS Buffer,0.5M,pH11.0  CAPS Buffer,0.5M,pH11.0  常溫保存

小鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人饑餓激素(GHRL)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

山羊胞外超氧化物歧化[Cu-Zn](SOD3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

犬前白蛋白(PA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

1瓶 SW1990細(xì)胞株 SW1990 低溫運(yùn)輸和保存

25mg 6- 羧基二乙酸熒光素 6-Carboxyflucrescein Diacetate -20℃保存

1g 硫酸卡那 Kanamycin Sulfate 室溫保存

倉(cāng)鼠白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒

50T 金黃菌耐藥基因PCR測(cè)定試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

EC肉湯（含小倒管） EC Broth 10ml*20支/包