冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

产品属性：

名称    J774A.1 (小鼠单核巨噬细胞) (种属鉴定正确)
别称 J-774A.1; J774.A1; J774 A1; J774A.1; J 774A.1; J774 A.1

种属 小鼠

年龄（性别） 成年

组织来源 巨噬细胞

生长特性 贴壁细胞，不用消化

细胞形态 单核细胞、巨噬细胞样

背景描述 J774A.1细胞来源于BABL/cN小鼠，有抗体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制；J774A.1细胞可产生IL-1β和大量的。

生物安全等级 1

生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例 1:3-1:4

推荐换液频率 2~3次/周

倍增时间 ~17小时

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

受体表达情况 Complement (C3), expressed;Fc receptor, IgG, high affinity I (Fcgr1), expressed

注意事项 1、该细胞不建议使用消化，会刺激分化； 2、 超过3天不传代细胞容易分化； 3、 培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象。

保藏机构 ATCC; TIB-67 DSMZ; ACC-170 ECACC; 91051511

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
大球盖菇   杏鲍菇

谢瓦曲霉   鸡纵

橙色粘球菌   产黄青霉

白色念珠菌ATCC90028冻干粉   多头霉

大毛霉   谢瓦曲霉
大鼠B细胞活化因子(BAFF)elisa检测试剂盒

大鼠B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子α(NFKBIA)elisa检测试剂盒

大鼠B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子ε(NFKBIE)elisa检测试剂盒

大鼠B-淋巴细胞趋化因子1(BLC-1/CXCL13)elisa检测试剂盒

大鼠BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)elisa检测试剂盒
J774A.1 (小鼠单核巨噬细胞)大鼠细胞分裂周期基因(CDC)elisa检测试剂盒

大鼠细胞胱硫醚γ裂解酶(CSE)elisa检测试剂盒

大鼠细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)elisa检测试剂盒

大鼠细胞核因子κB受体活化因子配基（RANKL）elisa检测试剂盒

大鼠细胞间粘附分子1(ICAM1)elisa检测试剂盒
实验报告：
产品仅用于科研一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大?。?/span>
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。