小鼠正常食管上皮細(xì)胞；MNEEC/HL-009圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱(chēng) 小鼠正常食管上皮細(xì)胞；MNEEC/HL-009圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專(zhuān)利保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于A(yíng)TCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀(guān)察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

GBP5/Guanylate binding protein 5  鳥(niǎo)嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白5抗體規(guī)格: 0.2ml
RIP2  受體結(jié)合絲氨酸蘇氨酸激酶2抗體規(guī)格: 0.2ml
CD31/PECAM-1  血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1抗體規(guī)格: 0.1ml
BMP9  骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PTEN(Ser385)  磷酸化瘤抑制基因PTEN抗體規(guī)格: 0.1ml
CCR10  細(xì)胞表面趨化因子受體10抗體規(guī)格: 0.1ml
MAGEA10  黑色素瘤相關(guān)抗原10抗體規(guī)格: 0.2ml
PPIL1  親環(huán)素相關(guān)蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
Caspase-6 (NT)  半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(N端)規(guī)格: 0.1ml
PNPLA6/NTE  含patatin樣磷脂酶6抗體規(guī)格: 0.1ml
PI 3 Kinase p85 beta  磷脂酰肌醇激酶p85β抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-B-Raf (Ser446)  磷酸化B-Raf抗體規(guī)格: 0.1ml
Destrin 19/ADF  肌動(dòng)蛋白解聚因子19抗體規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PDGFRA(Tyr1018)  磷酸化血小板源性生因子受體-α抗體規(guī)格: 0.1ml
phospho-SCNN1B(Ser633)   磷酸化上皮鈉通道β2抗體規(guī)格: 0.1ml
FAM129A/Cell growth inhibiting gene 39 protein  細(xì)胞生抑制基因39蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-p90RSK(Ser380)  磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml總測(cè)試盒 / 總脂酶測(cè)試盒    24T    18-0780-24
Denhardt 溶液，50×    100mL    91104A-100
200U        Therminator γ DNA 聚合酶
15 次        非酶 DNA 清除劑 -2
1g        L- 谷胱甘肽 ( 氧化型 )
100 次        植物種屬鑒定 PCR Mix 7
氯化    100g    CAS7447-40-7
增強(qiáng)型 DAB 顯色試劑盒    100mL    81223-100
大提柱式 DNA 清除劑    5次    90802-5
5μg        Oligo dT12-18 引物，0.5μg/μL
50mg        Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )
10mL        一步式廣譜 DNAout
50mL        SP 交換介質(zhì)
生物素化蛋白 L    0.5mg    131101-0.5
接頭 DNA(Hind Ⅲ -Sma I)    5nmol    130987C-5
200mL        小鼠白細(xì)胞分離液 1.093
50 次        即用型多重 PCR 試劑盒
100mg        5- 溴 -4- 氯 -3- 吲哚 -β-D- 半乳糖苷