小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A图片【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 小鼠皮下结缔组织细胞；L Wnt-3A图片
形态特性  成纤维细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性  L-M(TK-) cells (ATCC CCL-1.3) 用Wnt-3A表达载体转染并在含G418的培养基中筛选稳转株。 Wnt-3A基因编码一个有变异的信号功效分泌性糖蛋白。 Wnt基因控制胚胎发过程中的许多模式形成和生长事件。 这些细胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白。 它们是目前Wnt-3A条件培养基的来源。 由于这种条件培养基还包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，对于涉及Wnt-3A条件培养基的实验有必要用其来源细胞株(ATCC CRL-2648)作对照。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  优质胎牛血清，10%；0.4 mg/ml G-418
传代方法  消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件  *培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR 
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

SR 3677 （1 mg）N-[2-[2-（dimethylamino）ethoxy]-4-（1H-pyrazol-4-yl）phenyl]-2,3-dihydro-1,4-benzodioxin-2-carboxamide
CX-4945Silmitasertib； 5-[（3-chlorophenyl）amino]-benzo[c]-2,6-naphthyridine-8-carboxylic acid
Clinafloxacin （hydrochloride） （1 g）AM1091； 7-（3-ami-pyrrolidinyl）-8-chloro-1-cyclopropyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid
Pioglitazone （25 mg）5-[[4-[2-（5-ethyl-2-pyridinyl）ethoxy]phenyl]methyl]-2,4-thiazolidinedione
AB-FUBINACA isomer 5 （10 mg）N-（1-ami-oxobutan-2-yl）-1-（4-fluorobenzyl）-N-methyl-1H-indazole-3-carboxamide
（R）-nitro-Blebbistatin （25 mg）R-（
2,3-Ethylone isomer （hydrochloride） （10 mg）2,3-bk-MDEA isomer； 1-（benzo[d][1,3]dioxol-4-yl）-2-（ethylamino）propan-1-one, monohydrochloride
Fluorescent Substrate for Thioredoxin Reductase Activity Assay （1 ea）Fluorescent Substrate for Thioredoxin Reductase Activity Assay
小鼠肾组织核提取物Mouse Kidney Nuclear Extract （500 ug）
生物素标记单甲基化组蛋白H3K36多肽Biotinylated Monomethyl Histone H3K36 Peptide （200 ul）
Z-VDVAD-FMK， Caspase-2抑制剂（氟甲基酮）Caspase-2 Inhibitor Z-VDVAD-FMK
4’，5，7-Trihydroxyisoflavone 7-glucoside， Genistein 7-glucoside， Genistein-7-O-β-D-glucopyranosideGenistin
Sunitinib Maleate， SU-11248， Sutent， PHA-290940AD， PNU-290940ADSunitinib Malate （Sutent）
Pam3CSK4 . 3HClPam3Cys-Ser-（Lys）4， Trihydrochloride
5-（6-Quinoxalinylmethylene）-2，4-thiazolidine-2，4-dionePI3-K
4-（3’-Chloroanilino）-6，7-dimethoxyquinazoline； Tyrphostin AG 1478AG 1478
3’-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3’-deoxy-N，N-dimethyladenosine dihydrochloridePuromycin Dihydrochloride
RAD-001Everolimus
4-Iodo-3-nitrobenzamide； BSI-201Iniparib60801-30柱式腐殖酸清除剂30 次
SDS 溶液 ,10%，电泳100mL
DNase I 溶液1.5mL
BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞0.1mL×10
植物线粒体总蛋白提取试剂盒50 次
CAS314-13-6埃文斯蓝1g
90509-5包涵体中量纯化试剂盒5次
章鱼碱25mg
两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次
15mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)1个
AICAR(AMPK 激活剂 )5mg
一站式 Blue Native PAGE 电泳套装30 次
18-0750-500总抗氧化能力检测试剂盒 (ABTS 法 )500 次
100812-100BLOTTO 溶液100mL
TH1 菌种1mL
非冻型组织 RNA 保存液100mL
二甲苯青1g
植物种属鉴定 PCR Mix 4100 次
CAS9003-39-8聚乙烯吡咯烷酮 K360100g
100832-250四氮唑蓝 (NBT)250mg