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ATCC細(xì)胞支原體污染的熒光檢測方法

時間:2017-9-29閱讀:176
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ATCC細(xì)胞利用螢光染劑(bisbenzimide, Hoechst 33258)偵測支原體污染。此染劑會結(jié)合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區(qū)域,因為支原體之DNA中A-T含量占多數(shù)(55~80%),所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后,在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之螢光小點,即為支原體之DNA,證明有支原體之污染。

測試步驟用間接步驟,將待測細(xì)胞懸浮液或細(xì)胞培養(yǎng)液接種于指示細(xì)胞培養(yǎng)液中(indicator cell,例如Vero cell or 3T6 cell),然后培養(yǎng)指示細(xì)胞再作螢光染色。正負(fù)反應(yīng)對照組亦可以接種于indicator cell內(nèi)作為對照。

待測細(xì)胞亦可作直接測試,但需為吸附型ATCC細(xì)胞,培養(yǎng)后直接作螢光染色。有些細(xì)胞易有螢光背景,而干擾結(jié)果判讀,則建議使用接種于指示細(xì)胞之步驟。

特點:簡單、經(jīng)濟與靈敏,廣泛使用,可作為例行之偵測步驟??梢詡蓽y不易培養(yǎng)之支原體,例如M. hyorhinis,較直接培養(yǎng)法快,約一星期即可知道結(jié)果。

缺點:有時仍會有螢光背景,影響判讀。
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    (S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酸    BOC-L-Homophenylalanine    含量:    BR,98%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    (R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-4-苯基丁酸    BOC-D-Homophenylalanine    含量:    BR,98%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    甘氨酸單鈉鹽    Sodium Glycinate    含量:    BR,98%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    L-(+)-羥甲基吡咯烷    L-Prolinol    含量:    BR,98%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    N-(氨基亞氨基甲基)-N-甲基甘氨酸    Creatine    含量:    BR,98%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    L-2-乙酰氨基-3-甲基丁酸    N-Acetyl-L-Valine    含量:    BR,98%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    N-乙酰基-DL-色氨酸    N-Acetyl-DL-tryp tophane    含量:    BR,98.5%
進(jìn)口、國產(chǎn)    英文名稱:    N-乙酰氨基乙酸    N-Acetyl-glycine    含量:    BR,99%
ATCC細(xì)胞

 

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