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蒂科(上海)生物科技有限公司

HCT-8/FU細胞- HCT-8/FU耐藥株培養(yǎng)方法

時間:2017-4-12閱讀:1414

一.貼壁細胞  
客戶接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當(dāng)細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。 
二.懸浮細胞 
1. 接收到細胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。
三.一毫升小管操作方法  小管內(nèi)也是此細胞。 
1. 用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)。
2. 嚴格無菌操作,用吸管吸出管中細胞至9ml*培養(yǎng)基混勻。
3. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 
4.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。

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