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蒂科(上海)生物科技有限公司

冷凍細(xì)胞活化步驟

時間:2022-1-19閱讀:1369
1.冷凍細(xì)胞的活化原則為快速解凍,避免冰晶重新結(jié)晶對細(xì)胞造成傷害,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。


2.細(xì)胞活化后,約需數(shù)日,或繼代一至二代,其細(xì)胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)
生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。2y2Q O6\#o&h4@+z,~
3.材料37℃ 恒溫水,新鮮培養(yǎng)基,無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶,液氮或干冰容
4.步驟:
4.1操作人員應(yīng)戴防護(hù)面罩及手套,防止冷凍管可能爆裂之傷害。
4.2自液氮或干冰容器中取出冷凍管,檢查蓋子是否旋緊,由于熱脹冷縮過程,此時蓋子易
松掉。
4.3將新鮮培養(yǎng)基置于37°C水槽中回溫,回溫后噴以70%酒精并擦拭之,移入無菌操作臺內(nèi)。
4.4取出冷凍管,立即放入37°C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化以70%ethanol擦拭保存管外部,移入無菌操作臺內(nèi)。
4.5取出0.9ml解凍之細(xì)胞懸浮液,緩緩加入有培養(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)(稀釋比例1:10~1:15)混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。另取0.1ml解凍細(xì)胞懸浮液作存活測試。
4.6解凍后是否立即去除冷凍保護(hù)劑(例如DMSO或glycerol),依細(xì)胞種類而異,一般而言大都不需要立即去除冷凍保護(hù)劑。惟若要立即去除,則將解凍之細(xì)胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi),離心1,000rpm,5分鐘,移去上清液,加入新鮮培養(yǎng)基,混合均勻,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
4.7若不需立即去除冷凍保存劑,則在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。


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