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你知道蛋白層析純化系統(tǒng)如何使用嗎?

閱讀:405      發(fā)布時間:2022-8-24
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  蛋白層析純化系統(tǒng)是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異,在混合物通過含有填充顆粒的層析柱時,由于各種蛋白的分子大小不同,擴(kuò)散進(jìn)入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異,大的蛋白分子會被先洗脫出來,分子越小,越晚洗脫,從而達(dá)到分離蛋白的目的。一般來說,層析柱越細(xì)、越長純化的效果越好。能純化的蛋白分子量范圍很寬,純化過程中也不需要能引起蛋白變性的有機(jī)溶劑。
  蛋白層析純化系統(tǒng)建立蛋白質(zhì)純化工藝時,重要的是需要考慮純化得到的蛋白質(zhì)應(yīng)能滿足其后續(xù)應(yīng)用要求。蛋白質(zhì)的數(shù)量及純度都必須滿足實驗分析要求。而且,因為后續(xù)研究需要的是保持良好折疊結(jié)構(gòu)的活性蛋白質(zhì),因此蛋白質(zhì)行為的相關(guān)信息也需要考慮。
  在純化及后續(xù)的保存過程中,很多處理方法都會對蛋白質(zhì)的性質(zhì)產(chǎn)生影響,如蛋白質(zhì)的去折疊、聚集、降解和失活等。
  制定詳細(xì)計劃,在較短時間內(nèi)完成蛋白質(zhì)純化,并在穩(wěn)定的條件下進(jìn)行保存才算是成功地完成了其整個純化過程。
  蛋白層析純化系統(tǒng)遵循的基本原則:
  1.待純化無料樣品的來源,目的蛋白的理化性質(zhì)要充分了解熟悉(基本包括分子量、PI、主要雜蛋白來源等);
  2.純化工藝設(shè)計時要明確純化所要達(dá)到的期望目標(biāo)目標(biāo);
  3.依據(jù)所要達(dá)到的期望目標(biāo),對純度,回收率,活性、實驗成本等因素合理取舍,設(shè)計科學(xué)合理的純化工藝;
  4.熟悉蛋白純化過程的各種常用添加劑的性能和作用,合理的添加使用,可以是純化工藝事半功倍。

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