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核酸分離純化實驗技術(shù)指南

閱讀:1146      發(fā)布時間:2019-1-29
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核酸分離純化實驗技術(shù)指南:
      總RNA提取常見問題分析
      RNA降解
      1. 新鮮細胞:如果試劑沒有問題,且外源性污染也可以排除,那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如  果將裂解液直接加入培養(yǎng)皿中裂解細胞,一定要使裂解液能覆蓋住細胞。 
      2. 新鮮組織:某些富含內(nèi)源核酸酶的樣品(如肝臟,胸腺等),即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是:在液氮條件下將組織研碎,并且勻漿時使用更多裂解液。
      3.  冷凍樣品:樣品取材后應(yīng)立即置于液氮中速凍,然后移至-70℃冰箱保存。樣品決不能未經(jīng)液氮速凍而直接保存于-70℃冰箱中。冷凍樣品,即使是冷凍細胞,如果不在液氮條件下研磨碎,而直接加入裂解液中勻漿,RNA也比新鮮樣品更容易降解。樣品在與裂解液充分接觸前決不能出現(xiàn)融化,所以研磨用具必須預冷,在碾磨過程中要及時補充液氮。樣品研碎后,在液氮剛剛揮發(fā)完時,將樣品迅速轉(zhuǎn)移到含裂解液的容器中,立即混勻勻漿。
      4. 外源RNA酶的污染:試劑,器械及實驗環(huán)境中的RNA酶進入實驗系統(tǒng)。
      5. 內(nèi)源RNA酶的污染:抑制劑失效或者用量不夠,實驗樣品過多;勻漿時溫度過高。

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