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1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液

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更新时间:2021-02-05 11:50:41浏览次数:1843次

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1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液
酵母单杂交早是1993年由Li等从酵母双杂交发展而来,通过对报告基因的表型检测,分析DNA与蛋白之间的相互作用,以研究真核细胞内的基因表达调控。由于酵母单杂交方法检测某些转录因子与顺式作用元件专一性相互作用的敏感性和性,现已被用于克隆细胞中含量微弱的、用生化手段难以纯化的某些转录因子。

1M山梨醇溶液/酵母电转感受态细胞制备液

 

英文名:1M Sorbitol Solution

描述:

1M的山梨醇一般用于酿酒酵母或者裂殖酵母电转感受态的制备。

 

酵母感受态细胞的制备:

 

1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。

 

2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。

 

3.把酵母细胞接种到50 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD6001.3-1.5范围内。

 

4.将酵母菌置于冰上放置10 min后,收集细胞。1000 g,离心5 min, 去上清。

 

5.沉淀用30-50 ml的预冷的无菌水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。重复洗涤2次。

 

6.沉淀用5mL 冰上预冷的1M 山梨醇溶液重悬。1000 g,离心5 min,去上清。

 

7.沉淀用0.4 mL 的预冷的1M 山梨醇溶液重悬,按照40 uL 分装。

 

酵母转化:

 

1.40uL 的酵母感受态细胞中,加入5uL100ng)的质粒,混匀。

 

2.转移到预冷的电转槽中,电击。

 

3.在电转槽中加入500uL 预冷的1M 山梨醇溶液,轻柔混匀。

 

4.涂布于相应的筛选培养基上,28-30℃培养3-5天。

供应产品列表:

 

DO Supplement -Ade
DO Supplement -Ade/-His
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Met
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura/-Met
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Ura
DO Supplement -Ade/-His/-Met
DO Supplement -Ade/-His/-Trp
DO Supplement -Ade/-His/-Ura/-Trp
DO Supplement -Ade/-Leu
DO Supplement -Ade/-Leu/-His
DO Supplement -Ade/-Leu/-Trp
DO Supplement -Ade/-Leu/-Ura
DO Supplement -Ade/-Trp
DO Supplement -Ade/-Ura
DO Supplement -Arg
DO Supplement -Arg/-His/-Leu/-Lys/-Ura
DO Supplement -Arg/-Leu/-Ura
DO Supplement -Cys/-Met
DO Supplement -Cys/-Met/-Ura
DO Supplement -Cys-His/-Leu/-Met/-Trp/-Ura
DO Supplement -Glu/-Ura
DO Supplement -His
DO Supplement -His/-Leu/-Lys
DO Supplement -His/-Leu/-Lys/-Met/-Ura
DO Supplement -His/-Leu/-Lys/-Ura
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp/-Ura
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Ura

 双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录因子的参与。80年代的工作表明, 转录因子在结构上是组件式的(modular), 即这些因子往往由两个或两个以上相互的结构域构成,其中有DNA结合结构域(DNA binding domain,简称为BD)和转录结构域(activation domain,简称为AD),它们是转录因子发挥功能所的。单独的BD虽然能和启动子结合,但是不能转录。而不同转录因子的BD和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的转录的功能。如酵母细胞的Gal4蛋白的BD与大肠杆菌的一个酸性结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并转录。

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