糖原含量試劑盒說明書

測定意義：
糖原是由葡萄糖單位構成的高分子多糖，是糖的主要的儲存形式之一，主要貯存在肝和肌肉
中作為備用能量，分別稱為肝糖原和肌糖原。肝糖原可調節(jié)血糖濃度，當血糖升高時可在肝
臟合成糖原，血糖降低時，肝糖原則分解為葡萄糖以補充血糖。因此，肝糖原對維持血糖的
相對平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的儲存形式,在劇烈運動消耗大量血糖時，肌糖原不
能直接分解成血糖，必須先分解產生乳酸,隨血液循環(huán)到肝臟,通過糖異生轉變?yōu)楦翁窃蚱?br />萄糖。

測定原理：
蒽酮法。利用強堿性提取液提取糖原，在強酸性條件下利用蒽酮顯色劑測定糖原含量。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸（不允許快遞）和蒸
餾水。

試劑的組成和配制：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：0.1mg/mL 的葡萄糖標準液 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶， 4℃保存；

糖原提?。?br />1﹑細胞或細菌：收集500~1000 萬細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；加入0.75mL 提
取液超聲波破碎細菌或細胞（功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30 次）；轉移至
10mL 試管中，95℃水浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min 振搖試管1 次，使充分混
勻；取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測。
2﹑組織：稱取0.1~0.2g 樣品，加入0.75ml 提取液充分勻漿；轉移至10ml 試管中；95℃水
浴20min（蓋緊，防止水分散失），隔5min 振搖試管1 次，使充分混勻；待組織全部溶解后，
取出試管冷卻后，用蒸餾水定容到5ml，混勻，8000g 25℃離心10min，取上清液待測。

步驟和加樣表
1、分光光度計預熱30min 以上，調節(jié)波長至620nm，蒸餾水調零。
2、調節(jié)水浴鍋至95℃。
3、試劑二工作液的配制：在試劑二中倒入10mL 蒸餾水，緩慢倒入40mL 濃硫酸，充分溶
解混勻后使用；用不完的試劑4℃保存一周；
4、加樣表（在EP 管中反應）：
試劑（μL） 空白管 標準管 測定管
糖原提取液 250
試劑一 250
蒸餾水 250
試劑二 1000 1000 1000
混勻，95℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，于620nm 波長處，以蒸餾水調零，
分別讀取空白管、標準管和測定管吸光度，分別記為A1、A2 和A3。