KAPA hgDNA定量&QC試劑盒，是基于SYBR Green I染料法優(yōu)化的高質量qPCR檢測試劑盒，包含KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix預先稀釋的一系列DNA標準品，以及針對于人類基因組單拷貝的高度保守區(qū)域的不同位點所設計的引物預混液。最小片段所對應的引物，用于獲得絕對定量的結果，而額外的引物，用于獲得在DNA樣本中可擴增模板量(質量高的核酸片段)的信息。這個試劑盒由此所產(chǎn)生的質量分數(shù)(即Q-ratios)，可以用于預測文庫的產(chǎn)量，或者對于如FFPE DNA這類樣本質量變化很大的樣本的工作流程進行調整。

產(chǎn)品名稱：KAPA hgDNA定量及QC試劑盒

產(chǎn)品貨號：KK4960

產(chǎn)品特點：

在單次檢測中，同時評估樣本量以及樣本質量

可以將質量分數(shù)(Q-ratios)與測序相關指標相關聯(lián)

高性能的KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix

預先稀釋好的DNA標準品以及可以直接使用的引物

多功能、易于自動化的工作流程

產(chǎn)品原理：

一組DNA標準品，使用三對不同引物，用于產(chǎn)生(最多)三組標準曲線。這三對引物的擴增目標，位于某高度保守、單拷貝的人類基因組位點，其大小分別為41 bp, 129 bp以及305 bp。41 bp檢測用于DNA樣品的絕對定量。對于評估DNA質量，使用129 bp和/或305 bp引物預混液生成標準曲線并且檢測樣本。由于低質量的DNA樣本的長片段擴增效率會大幅度降低，相對的DNA質量可以通過41 bp檢測的濃度，對于129 bp或者305 bp檢測的濃度進行均一化，或者在此DNA樣本中可被擴增的物質的量來進行推測。這種通過標準化產(chǎn)生的質量分數(shù)(值介于0和1之間)，可以用于指示DNA的質量，或者在此DNA樣本中可被擴增的物質的量。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

指示樣品是否有足夠的量以及質量來成功構建文庫

未通過質控的樣本，不再進行后續(xù)文庫構建以及測序步驟，從而節(jié)約時間和精力

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使用預期：

Q129/41 比值和測序中的關鍵指標（如重復率）具有相關性

從250 ng Covaris打斷的FFPE DNA樣本(n=14)和對照組DNA(分別從培養(yǎng)細胞、新鮮冰凍樣本和血液中提取，n=6)，進行手動文庫構建。樣本按照Q129/41-比例升序在x軸上從左至右排列(FFPE樣本用黃色表示，對照組DNA用橙色表示)。文庫構建采用的是NEBNext® 試劑(New England Biolabs)，其中靶標捕獲前和靶標捕獲后的擴增環(huán)節(jié)(10個循環(huán))采取KAPA HiFi 試劑盒。靶標捕獲使用的是定制的SeqCap EZ panel (300 genes,0.9 MB)。在Illumina HiSeq平臺上進行了測序(2 x 100 bp)。FFPE樣本的平均靶標覆蓋率(藍色點)是對照組的四倍(1,247X, vs. 301X)，平均重復率(紅色點)是對照組的兩倍(75% vs. 38%)。Q129/41 比值 > 0.4 的FFPE樣本所產(chǎn)出的文庫能夠達到測序質量要求。