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一抗可用于检测糖尿病、癌症、阿尔茨海默病和帕金森病的生物标志物。二抗则主要用于检测和纯化抗原蛋白。

二抗在标记和检测方面比较灵敏和灵活。所以，它们在流式细胞术、蛋白质印迹和细胞成像等一系列应用中用于一抗的比色、化学发光和荧光检测。二抗类型的选择基于一抗的类别：免疫球蛋白 IgG 或 IgM、标签类型和来源宿主。

由于大多数一抗是使用少数宿主物种开发的，并且大多数一抗属于 IgG 类，因此制造商通常提供可用于许多不同检测程序和系统的即用型二抗。常用的二抗有抗兔 IgG、抗小鼠 IgG、抗鸡 IgG 或抗山羊 IgG。所选择的二抗应始终能够识别产生一抗的宿主物种，例如，为了检测从小鼠产生的一抗，使用抗小鼠二抗。在 ELISA 和蛋白质印迹中，标记通常是化学发光、比色或基于荧光的，但在流式细胞术和免疫荧光中，仅使用荧光标记。

产品应用  WB=1:500-2000 ELISA=1:5000-10000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500 石蜡切片需做抗原修复）

not yet tested inother applications.

optimaldilutions/concentrations should be determined by the end user.

别 名  ATG4D phospho-S467); 9830134P12Rik; APG4 autophagy 4 homolog D; APG4 D; APG4, S. cerevisiae, homolog of, D; APG4D; ATG4 autophagy related 4 homolog D S. cerevisiae); Atg4d; ATG4D_HUMAN; Atg4dl; AUT like 4 cysteine endopeptidase; AUT-like 4 cysteine endope

一、 免疫动物选择

根据需要产生目标抗原的免疫反应，选择合适的免疫动物。例如，小鼠是免疫动物之一，因其易于操作且在免疫应答方面较为强大。

二、抗原免疫

将目标抗原注射到免疫动物体内，通常需要多次免疫以激发免疫反应。可以选择不同的免疫路线，如皮下、腹腔、静脉等。

三 、细胞融合

从免疫动物获得脾细胞或淋巴细胞，与骨髓瘤细胞或其他癌细胞（如SP2/0、NS0等）融合，形成杂交瘤细胞。融合细胞通常使用（PEG）或电穿孔等方法促进细胞融合。

四、 杂交瘤细胞筛选

对融合细胞进行筛选，一般使用HAT选择性培养基，通过对非杂交瘤细胞和单克隆杂交瘤细胞的抗代选择，筛选出产生目标抗体的单克隆杂交瘤细胞。

五、 单克隆抗体生产

从筛选出的单克隆杂交瘤细胞中获取单一细胞系，并进行大规模培养和产生抗体。一般可采用体外或体内方式生产单克隆抗体。

六、抗体纯化

通过不同的方法对产生的单克隆抗体进行纯化，去除杂质，例如使用蛋白A/G层析、蛋白L层析、蛋白G层析等。

七、 鉴定和验证

对纯化后的单克隆抗体进行鉴定和验证，例如使用酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western blotting）等方法，确定其免疫特异性和活性。

八、应用

将制备好的单克隆抗体应用于具体的研究、诊断或治疗等领域，例如免疫组化、流式细胞术、免疫疫治疗等。