“雜音"染色種類繁多，產(chǎn)生的原因也多種多樣，為了便于說明，筆者將其歸納為下面幾種。
1、灶片狀著色
切片中著色區(qū)東一塊西一塊，呈灶片狀分布，出現(xiàn)這種問題的原因有：（1）裱片時水未排盡，在局部形成氣泡使組織突起，染色時試劑滲入后不易洗盡，顯色過深所致。解決辦法是，漂片盒里的氣泡應(yīng)去盡，晾片熱臺不能平放，應(yīng)有45度左右的斜度，利于水流走和蒸發(fā)。（2）壞死組織灶，組織壞死后細胞破壞、酶的釋放、蛋白游離、分解，復(fù)雜的肽鏈殘段（如Fc段）可能與一抗或/和二抗結(jié)合導致zui終著色。解決辦法是在選擇染色切片時應(yīng)避免選擇壞死組織較多的切片。（3）制作APES膠片時，膠的濃度太高，干燥后在玻片上留下白色小點，顯色時白色小點著色。解決辦法是按照標準的制備方法進行，即5%鹽酸酒精（5 ml鹽酸+95%酒精95 ml）浸泡玻片4小時、熱水沖洗玻片1小時、蒸餾水洗玻片1分鐘、丙酮浸泡玻片5秒鐘后空氣干燥（室溫）、2% APES（2 ml APES+98 ml丙酮）浸泡玻片5分鐘、玻片過一下丙酮（1-2秒鐘）、玻片過一下蒸餾水（1-2秒鐘）、37 度干燥、室溫儲存?zhèn)溆?。如果制片過程中，因丙酮逐漸揮發(fā)而膠變濃時可適當加入一些丙酮。
2、細胞漿著色
胞漿著色是所有“雜音"染色中有欺騙性的著色，著色區(qū)局限在細胞內(nèi)，間質(zhì)無著色，看上去與真實的免疫反應(yīng)著色幾乎一樣，很難區(qū)別。胞漿里含有較多的蛋白質(zhì)，因此，很多非特異性的染色除了見于間質(zhì)也可以出現(xiàn)在胞漿中。這種原因造成的著色，可以通過血清封閉解決。還有因內(nèi)源酶造成的著色，如血紅蛋白（紅細胞）、肌紅蛋白（肌細胞）、細胞色素（粒細胞、單核細胞）、過氧化氫酶（肝、腎），這些可用過氧化氫進行封閉。巨噬細胞吞噬各種抗原物質(zhì)或Fc片斷而出現(xiàn)胞漿著色，這種著色不易避免，但可以通過形態(tài)學辨認出巨噬細胞而引起重視。內(nèi)源性生物素的著色有欺騙性，因為它廣泛的存在于組織細胞中，我們研究結(jié)果顯示：冰凍組織中存在內(nèi)源性生物素，經(jīng)福馬林固定石蠟包埋后生物素被封閉，加熱抗原修復(fù)后造成內(nèi)源性生物素暴露，內(nèi)源性生物素暴露的強度在不同的組織有所不同，從弱陽性（+）到強陽性（+++），內(nèi)源性生物素在組織中的分布形式，既有散在分布也有彌漫分布，主要以顆粒狀形式存在于胞漿中，內(nèi)源性生物素廣泛存在于上皮源性組織，特別是腺上皮組織，亦存在部分非上皮組織，內(nèi)源性生物素不僅存在人體組織也存在大鼠組織，內(nèi)源性生物素暴露的強弱與修復(fù)液有關(guān)，其強度增加依次為：檸檬酸、EDTA、EGTA，熱抗原修復(fù)暴露的內(nèi)源性生物素可被雞蛋清封閉，非生物素檢測系統(tǒng)Polymer兩步法（EliVision、EnVision）可避免生物素干擾。
3、細胞核著色
不適當?shù)慕M織處理可以出現(xiàn)細胞核著色，如組織在二甲苯里浸泡時間太長（如從星期五浸泡到下星期一）、緩沖液中浸泡時間太長、組織變干、微波修復(fù)液的PH值和修復(fù)時間不當或修復(fù)過程中修復(fù)液留下得太少，未沒過組織等。解決辦法是嚴格按照操作常規(guī)進行工作。
4、間質(zhì)著色
著色部位主要在間質(zhì)，間質(zhì)著色的原因很多，如抗體與組織中的蛋白質(zhì)因蛋白疏水基團相互作用形成非特異性的連接而著色，加一抗前的血清封閉這一步就是為了避免非特異型的結(jié)合。又如血清中的免疫球蛋白常常滲出到組織間質(zhì)，很容易與抗體結(jié)合，造成間質(zhì)著色，特別是lambda和kappa染色時。當甲狀腺膠質(zhì)外溢到組織間質(zhì)時，做甲狀腺球蛋白染色也會出現(xiàn)間質(zhì)著色?？贵w不純或抗體被污染也可出現(xiàn)間質(zhì)著色，我們曾遇到CD20抗體不純，除了染上B細胞外還染上了間質(zhì)。
11
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)