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上海一研生物科技有限公司

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大鼠胰島細胞培養(yǎng)實驗原理

閱讀:1471      發(fā)布時間:2015-4-28
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 實驗方法原理 
水合氯醛腹腔麻醉,采用膠原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度離心的方法分離、純化大鼠胰島,并分離、培養(yǎng)胰島單細胞。

1. 用無菌D-Hanks’液將組織塊清洗 2~3 次,加入新鮮酶液繼續(xù)消化,重復(fù)上述步驟,此時組織塊邊緣模糊。
2. 將組織塊浸入消化酶液中,38℃±1℃消化10 分鐘,將消化酶液與組織塊分開,組織塊重新加入新鮮消化酶液進行消化;而原消化酶液1500  rpm離心 10 分鐘,取沉淀即為消化下的細胞,重新用無菌D-Hanks’懸浮,離心,重復(fù) 1~2 次,再用培養(yǎng)基洗 2~3 次,用培養(yǎng)基懸浮即得細胞懸液。
3. 將消化過的組織塊重復(fù)消化5~6 次至組織塊消化*,重復(fù)以上操作。
4. 合并幾次所得細胞懸液,計數(shù),大鼠調(diào)整細胞濃度為 2×105個細胞/mL,將細胞懸液接種于24 孔塑料培養(yǎng)板中,每孔1 mL,置于37℃,5%CO2,飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
5. 由于成纖維細胞貼壁要比胰島細胞迅速,接種15 h 后,輕輕振蕩培養(yǎng)板,將上面未貼壁的細胞接入新的培養(yǎng)板中,可除去部分成纖維細胞。

0.2g 薯莨 TLC法鑒別 121295-0301
3.0g 蒺藜 TLC法鑒別 121296-200703
2.0g 石吊蘭 TLC法鑒別 121297-
1.0g 隔山消 TLC法鑒別 121298-200402
0.5g 大果木姜子 TLC法鑒別 121300-0301
5.0g 羊奶奶葉 TLC法鑒別 121301-
1.0g 見血飛 TLC法鑒別 121302-200301
1.0g 甘草(脹果甘草) TLC法鑒別 121303-200502
大鼠1g 莪術(shù)(溫郁金) TLC法鑒別 121304-
2.0g 結(jié)石草 TLC法鑒別 121305-200301
0.5g 紫色姜 TLC法鑒別 121306-200301

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