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人血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)步驟和實驗方法

閱讀：1684      發(fā)布時間：2023-2-9
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 　　人血管平滑肌細(xì)胞是構(gòu)成血管壁組織結(jié)構(gòu)及維持血管張力的主要細(xì)胞成分，其結(jié)構(gòu)及功能。的改變可導(dǎo)致細(xì)小動脈硬化甚至高血壓的發(fā)生發(fā)展。高血壓病是一種以細(xì)胞增殖。為主要病變的疾病。高血壓病時血管結(jié)構(gòu)的改變主要表現(xiàn)在細(xì)胞肥大、增殖及結(jié)。締組織含量增加，中小動脈壁肥厚。
 
　　人血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)步驟：
　　1）復(fù)蘇細(xì)胞：將細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
 
　　2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
　　人血管平滑肌細(xì)胞的實驗方法：
　　1、分離與培養(yǎng)：麻醉后取胸主動脈及腹主動脈，將血管組織剪成小塊培養(yǎng)于含有10%血清的DMEM低糖培養(yǎng)基中。待細(xì)胞生長至融合后采用胰酶消化傳代，采用細(xì)胞進(jìn)行實驗。
 
　　2、增殖實驗：將細(xì)胞接種至96孔板，待細(xì)胞貼壁后換用無血清的DMEM低糖培養(yǎng)基饑餓24h。采用細(xì)胞計數(shù)試劑盒測定的吸光度值，以各組吸光度值與初始吸光度的比值作為各組的相對細(xì)胞活力，并以此繪制細(xì)胞增殖曲線。
 
　　3、劃痕實驗：將細(xì)胞接種于12孔板，待細(xì)胞生長融合時換用無血清DMEM低糖培養(yǎng)基饑餓24h，采用無菌吸頭劃痕并采用PBS沖洗2次。換用條件培養(yǎng)基孵育24h，并拍照觀察。每組隨機取5個視野，計數(shù)遷移細(xì)胞的數(shù)目，以此判斷細(xì)胞的遷移活性。

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