1.培養(yǎng)基
種子培養(yǎng)基的原材料質(zhì)量的控制類似于孢子培養(yǎng)基原材料質(zhì)量的控制。種子培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)適合種子培養(yǎng)的需要,一般選擇一些有利于孢子發(fā)芽和菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基,在營(yíng)養(yǎng)上易于被菌體直接吸收和利用,營(yíng)養(yǎng)成分要適當(dāng)?shù)刎S富和*,氮源和維生素含量較高,這樣可以使菌絲粗壯并具有較強(qiáng)的活力。另一方面,培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分要盡可能地和發(fā)酵培養(yǎng)基接近,以適合發(fā)酵的需要,這樣的種子一旦移入發(fā)酵罐后也能比較容易適應(yīng)發(fā)酵罐的培養(yǎng)條件。發(fā)酵的目的是為了獲得盡可能多的發(fā)酵產(chǎn)物,其培養(yǎng)基一般比較濃,而種子培養(yǎng)基以略稀薄為宜。種子培養(yǎng)基的pH值要比較穩(wěn)定,以適合菌的生長(zhǎng)和發(fā)育。pH值的變化會(huì)引起各種酶活力的改變,對(duì)菌絲形態(tài)和代謝途徑影響很大。例如,種子培養(yǎng)基的pH值控制對(duì)四環(huán)素發(fā)酵有顯著影響。
2.培養(yǎng)條件
種子培養(yǎng)應(yīng)選擇zui適溫度,前面已有敘述。培養(yǎng)過(guò)程中通氣攪拌的控制很重要,各級(jí)種子罐或者同級(jí)種子罐的各個(gè)不同時(shí)期的需氧量不同,應(yīng)區(qū)別控制,一般前期需氧量較少,后期需氧量較多,應(yīng)適當(dāng)增大供氧量。在青霉素的種子制備過(guò)程中,充足的通氣量可以提高種子質(zhì)量。例如,將通氣充足和通氣不足兩種情況下得到的種子都接入發(fā)酵罐內(nèi),它們的發(fā)酵單位可相差1倍。但是,在土霉素發(fā)酵中,一級(jí)種子罐的通氣量小一些卻對(duì)發(fā)酵有利。通氣攪拌不足可引起菌絲結(jié)團(tuán)、菌絲粘壁等異?,F(xiàn)象。過(guò)程中,有時(shí)種子培養(yǎng)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫而影響正常的通氣攪拌,此時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制,甚至可考慮改變培養(yǎng)基配方,以減少發(fā)泡。
對(duì)青霉素的小罐種子,可采用補(bǔ)料工藝來(lái)提高種子質(zhì)量,即在種子罐培養(yǎng)一定時(shí)間后,補(bǔ)入一定量的種子培養(yǎng)基,結(jié)果種子罐放罐體積增加,種子質(zhì)量也有所提高,菌絲團(tuán)明顯減少,菌絲內(nèi)積蓄物增多,菌絲粗壯,發(fā)酵單位增高。
3.種齡
種子培養(yǎng)時(shí)間稱為種齡。在種子罐內(nèi),隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),菌體量逐漸增加。但是菌體繁殖到一定程度,由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗和代謝產(chǎn)物積累,菌體量不再繼續(xù)增加,而是逐漸趨于老化。由于菌體在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,不同生長(zhǎng)階段的菌體的生理活性差別很大,接種種齡的控制就顯得非常重要。在工業(yè)發(fā)酵中,一般都選在生命力極為旺盛的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,菌體量尚未達(dá)到zui高峰時(shí)移種。此時(shí)的種子能很快適應(yīng)環(huán)境,生長(zhǎng)繁殖快,可大大縮短在發(fā)酵罐中的遲滯期(調(diào)整期),縮短在發(fā)酵罐中的非產(chǎn)物合成時(shí)間,提高發(fā)酵罐的利用率,節(jié)省動(dòng)力消耗。如果種齡控制不適當(dāng),種齡過(guò)于年輕的種子接入發(fā)酵罐后,往往會(huì)出現(xiàn)前期生長(zhǎng)緩慢、泡沫多、發(fā)酵周期延長(zhǎng)以及因菌體量過(guò)少而菌絲結(jié)團(tuán),引起異常發(fā)酵等等;而種齡過(guò)老的種子接入發(fā)酵罐后,則會(huì)因菌體老化而導(dǎo)致能力衰退。在土霉素中,一級(jí)種子的種齡相差2~3 h,轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐后,菌體的代謝就會(huì)有明顯的差異。
zui適種齡因菌種不同而有很大的差異。細(xì)菌的種齡一般為7~24 h,霉菌種齡一般為16~50 h,放線菌種齡一般為21~64 h。同一菌種的不同罐批培養(yǎng)相同的時(shí)間,得到的種子質(zhì)量也不*一致,因此zui適的種齡應(yīng)通過(guò)多次試驗(yàn),特別要根據(jù)本批種子質(zhì)量來(lái)確定。
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