費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種的傳代和保藏
按照實(shí)驗(yàn)室制定的菌種使用與管理規(guī)程進(jìn)行傳代和保藏。美國藥典(USP)中規(guī)定：“將微生物接種至一新鮮培養(yǎng)基上／內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代”，因此，當(dāng)原始菌種復(fù)溶并轉(zhuǎn)至一培養(yǎng)基內(nèi)生長，即認(rèn)為已傳代一次，”并規(guī)定“菌種的傳代次數(shù)(自原始菌種凍干粉起)不得超過5代”。我國的GMP認(rèn)證中也如此要求，并且中國藥典2005年版藥典也已做出“菌種的傳代次數(shù)(自原始菌種凍干粉起)不得超過5代”這個(gè)明確的規(guī)定。這就要求微生物實(shí)驗(yàn)室必須具有一種簡(jiǎn)便易行的方法，既保證菌種的長期有效，叉避免頻繁購買菌種及復(fù)壯菌種等費(fèi)時(shí)耗力的工作。
在這個(gè)方法中，費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌菌種被分為兩類，傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。
實(shí)驗(yàn)證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，zui早的甘油冷凍管代數(shù)為第2代(G2)，以每隔兩年轉(zhuǎn)接一次計(jì)算，轉(zhuǎn)至第4代時(shí)(G4)，需耗時(shí)6年，即一支凍干管內(nèi)提供的菌種，按照此方法保藏使用可在6年內(nèi)為整個(gè)實(shí)驗(yàn)室提供有效菌種，從而使菌種傳代和保藏工作大大簡(jiǎn)化。但是，費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌這種方法主要適用于細(xì)菌、酵母菌的傳代、保藏，對(duì)真菌和芽胞類細(xì)菌則需應(yīng)用其他方法。
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