梯度PCR儀的應(yīng)用

閱讀：3344發(fā)布時(shí)間：2017-6-5

梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴(kuò)增儀。PCR反應(yīng)能否成功，退火溫度是關(guān)鍵，梯度PCR儀每個(gè)孔的溫度可以在范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置。

一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱之為梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同的DNA片段其適合的退火溫度不同，通過(guò)設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增，從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增，這樣可節(jié)省試驗(yàn)時(shí)間、提高實(shí)驗(yàn)效率，又節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。

PCR儀適用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、臨床診斷、流行病學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測(cè)、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為特征的、以檢測(cè)DNA/RNA為目的的各種病原體檢測(cè)及基因分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀原理：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。

在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上添加了熒光染料或熒光探針。熒光染料能特異性摻入DNA雙鏈，發(fā)出熒光信號(hào)，而不摻入雙鏈中的染料分子不發(fā)出熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物增加*。

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