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　　BD 流式細(xì)胞儀是集激光技術(shù)、電子物理、光電測量、計算機(jī)及細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)于一體的多參數(shù)細(xì)胞分析儀器，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域。其核心功能是通過液流系統(tǒng)將細(xì)胞或微粒排列成單列，依次通過激光束檢測點(diǎn)，利用光學(xué)系統(tǒng)激發(fā)熒光標(biāo)記物并捕獲散射光與熒光信號，最終通過電子系統(tǒng)將光信號轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號進(jìn)行多維度分析。

　　其液流系統(tǒng)由鞘液管、樣品管和噴嘴組成，通過流體動力學(xué)聚焦使細(xì)胞懸浮液形成直徑約3-10μm的穩(wěn)定液柱，確保每個細(xì)胞獨(dú)立通過激光檢測區(qū)。光學(xué)系統(tǒng)采用氬離子激光器（488nm）或氪離子激光器（647nm），激發(fā)細(xì)胞表面或內(nèi)部的熒光染料（如FITC、PE）。前向散射光（FSC）反映細(xì)胞體積，側(cè)向散射光（SSC）揭示胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)，而熒光信號強(qiáng)度則對應(yīng)標(biāo)記抗原或核酸的濃度。光電倍增管（PMT）將光信號轉(zhuǎn)換為電脈沖，經(jīng)模數(shù)轉(zhuǎn)換后生成FCS格式數(shù)據(jù)文件。

　　BD 流式細(xì)胞儀在實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

　　1、儀器校準(zhǔn)與質(zhì)檢

　　開機(jī)預(yù)熱：提前30分鐘開機(jī)，使激光和檢測系統(tǒng)穩(wěn)定。

　　光路校準(zhǔn)：使用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球（如Flow Check或CytoGlow）調(diào)整激光延遲、靈敏度及PMT電壓，確保液流居中。

　　檢查背景噪聲：運(yùn)行緩沖液（如PBS），確保散射光和熒光通道的基線平穩(wěn)，無異常信號。

　　2、樣本制備

　　細(xì)胞濃度：調(diào)整細(xì)胞濃度至5×10?~1×10?cells/mL（過高易導(dǎo)致堵塞，過低降低檢測效率）。

　　單細(xì)胞懸液：機(jī)械法（研磨）或酶消化法（如膠原酶）處理組織，過濾去除團(tuán)塊。

　　3、染色與孵育：

　　表面抗體：4℃避光孵育15~30分鐘，PBS洗滌后重懸。

　　胞內(nèi)染色：破膜劑（如BD Fix&Perm）處理后孵育胞內(nèi)抗體。

　　活性染料：如PI（死細(xì)胞染色）或Calcein-AM（活細(xì)胞標(biāo)記）。

　　4、對照設(shè)置：

　　空白對照：未染色的細(xì)胞用于確定熒光閾值。

　　單標(biāo)對照：單個熒光標(biāo)記的樣本用于調(diào)整補(bǔ)償（Compensation）。

　　同型對照：用于排除非特異性結(jié)合（如ISO型抗體）。