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产品简介

供货周期	一个月以上	应用领域	医疗卫生,生物产业

可用于活细胞的不可逆GST抑制剂
CNBSF ＜Irreversible GST Inhibitor＞
CNBSF（2-chloro-5-nitrobenzensulfonyl fluoride）是针对谷胱甘肽 S-转移酶（GST）的不可逆性抑制剂。与目前已知的作为GST抑制剂广泛使用的利尿酸相比，抑制活性明显更高，且因其不可逆性，可长期保持GST失活。

详细介绍

可用于活细胞的不可逆GST抑制剂

CNBSF ＜Irreversible GST Inhibitor＞

CNBSF（2-chloro-5-nitrobenzensulfonyl fluoride）是针对谷胱甘肽 S-转移酶（GST）的不可逆性抑制剂。与目前已知的作为GST抑制剂广泛使用的利尿酸相比，抑制活性明显更高，且因其不可逆性，可长期保持GST失活。

※ 本产品基于名古屋大学理科研究科阿部洋教授的研究成果商品化而成。

※ 本产品仅供研究，研究以外不可使用。

添加CNBSF至HeLa细胞中不可逆地抑制细胞内的GST后，使用用于活细胞的GST活性检测探针DNs-Rh（#FDV-0030）观察残留的GST活性?？煞⑾?， CNBSF的添加显著地抑制了细胞内GST的酶活性。

◆GST以及抑制剂的含义

谷胱甘肽S-转移酶（GST）家族是广泛存在于细菌和动植物的酶家族，具有在细胞内将疏水性外源性物质（xenobiotics）结合到谷胱甘肽（GSH）中并转换为GSH共轭物（GSH-conjugate）的活性。MRP（multidrug resistance-associated protein）转运蛋白积极地将GSH共轭物释放到细胞外，有着去除杂质的功能。因此，GST作为解毒因子，将可能成为细胞毒素的外来化合物排出细胞而起作用。

另一方面，由于大多数抗癌药等药物也会通过GST转换为GSH共轭物排出细胞外，因此GST作为耐药因子，也呈现出了降低药效的负面影响。尤其是随着癌症的恶化，特定GST亚型（GSTP1）的表达水平增强，由此可推断出癌细胞获得了强耐药性。虽然可以期待通过抑制GST活性提高抗癌药在细胞内的滞留性，然而迄今使用的GST抑制物质并不完善。传统的GST抑制物质主要使用与GSH竞争抑制的竞争性抑制物质。然而，尽管这些竞争性抑制物质在体外实验中展现出色的抑制活性，但从细胞内的情况来看，GSH浓度约为数毫摩尔便算是*浓度，在细胞内引发竞争、获得充分的抑制效果是十分困难的。

◆新型GST抑制策略 BSF抑制剂

名古屋大学的阿部洋教授等人使用benzensulfonyl fluoride（BSF）基作为新的GST抑制策略，致力于制造在细胞内的不可逆性抑制物质，并在后成功开发出在活细胞内呈现出色抑制活性的CNBSF ¹^）。CNBSF拥有细胞膜穿透性，进入细胞后与GST的杂质识别部位H-site结合。GSH与GST的G-site结合，CNBSF在GST的蛋白内部附着到GSH上转换为GSH共轭物（GS-5NBSF），而GS-5NBS立刻与GST的Tyr108（GSTP_1-1时）发生不可逆反应。这个反应使GS-BSF无法从GST上脱离，并且由于堵塞了H-site、G-site，使GST失活。与传统竞争性抑制物质相比，这个方法能够使GST不可逆性地失活，达到长期抑制的效果。

◆详细原理

■　抑制反应机构模型（以GSTP_1-1为例）

1.　CNBSF和GSH分别与GST的H-site、G-site结合，GST的酶活性依赖GSH的硫醇根阴离子与CNBSF反应。

1.　CNBSF的氯离子CI^-作为离去基团而脱离。

2.　在GST酶内生成GS-5NBSF。

3.　在GS-5NBSF的benzensulfonyl fluoride基中GSTP_1-1与Tyr108发生羟基反应。

4.　伴随着氟离子F⁻的脱离，GST与GS-5NBSF通过共价键交联。

◆特点

●　拥有膜穿透性，可用于活细胞

●　在细胞内通过GST附着于GSH，作为GST抑制物质发挥功能

●　因为是不可逆性抑制物质，可长期抑制。另外，不同于传统的可逆性化合物，在清洗后仍然保持抑制作用

●　与已知GST抑制物质ethacrynic acid（EA）相比，在活细胞实验中呈现高抑制活性

●　可与广泛的GST家族反应

●　经质谱确认本产品与内源性GST（GSTP1-1）共价结合

◆原著文献

1. Shishido, Y., et al., ChemBioChem. (in press),

1. "A covalent inhibitor for Glutathione S-Transferase Pi (GSTP1-1) in human cells."

◆应用实例

■　不可逆性GST抑制活性

使用GSTP_1-1重组体在体外实验评价抑制活性。GSTP_1-1在含有0.1 mM抑制物质的情况下于37°C反应2小时，在有和无超滤清洗后，使用1 μM的GST活性检测探针DNs-Rh（#FDV-0030）评价GST活性。从清洗后GST活性恢复可知，ethacrynic acid（EA）是可逆性抑制物质，从CNBSF清洗后仍保持抑制活性来看，CNBSF对GST的抑制是不可逆的。

■　活细胞中GST的抑制活性

用胰蛋白酶脱离NCI-H522细胞使其悬浮，然后添加1 mM的抑制物质在37°C下孵育15分钟。用PBS清洗细胞后，添加2.5 μM DNs-Rh（#FDV-0030），在37°C下反应1小时。然后再次使用PBS清洗细胞，去除未反应的试剂后，用流式细胞仪（Ex 490/Em 520 nm）定量。添加了CNBSF的细胞中，GST活性几乎*消失，而且效果更甚于EA。