立克次氏体通用PCR试剂盒

Rickettsia spp.

产品及特点

立克次氏体（Rickettsia）为革兰氏阴性菌，是一类专性寄生于真核细胞内 的 G-原核生物。是介于细菌与病毒之间，而接近于细菌的一类原核生物。一般 呈球状或杆状,是专性细胞内寄生物，主要寄生于节肢动物，有的会通过蚤、虱、 蜱、螨传入人体、如斑疹伤寒、战壕热。因此对立克次氏体进行快速灵敏的诊 断具有重要的意义。本产品就是为此目的根据 PCR 原理开发的产品，它具有下 列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2.引物经过精心优化，专一性强，只扩增立克次氏体，但跟其他微生物无交 叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

立克次氏体通用PCR试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。 

自备试剂 样品 DNA。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 如果有 N 个样品，必须设置 N+2 个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳 性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此 作为 PC。另外用水作为 NC。

2. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。 

二、设置 PCR 反应（40μL 体系）

3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分： 

4. 按下表设置 PCR 反应：

三、电泳检测

5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。