目錄:北京索萊寶科技有限公司>>基因工程>>感受態(tài)細胞>> C1100-10Solarbio DH5α感受態(tài)細胞
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10×100μl |
|---|---|---|---|
| 貨號 | C1100 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),石油 |
| 主要用途 | 本公司生產的DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到,可用 |
Solarbio DH5α感受態(tài)細胞
| 英文名稱 | E.coli DH5α Competent Cells |
|---|---|
| 儲存條件 | -70℃保存，液氮保存少一年，-70℃保存少6個月 |
| 外觀（性狀） | 干冰運輸，單加10kg干冰費 |
| 單位 | 袋 |
本公司生產的DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存3-5個月轉化效率不發(fā)生改變。
基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點: 一種用于鋪制與培養(yǎng)質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的產物可與pUC載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)β互補，可用于藍白斑篩選。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）
1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例。
2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。
3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉化產物涂板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事項：
1、感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。
4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。
5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到低。
相關文獻：
《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30711013
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