您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品分類品牌分類
-
臺式大容量冷凍離心機(jī) 臺式低速自動平衡離心機(jī)轉(zhuǎn)子 臺式高速冷凍離心機(jī) 臺式高速冷凍離心機(jī)轉(zhuǎn)子 高速冷凍離心機(jī)轉(zhuǎn)子 冷凍離心機(jī)轉(zhuǎn)子 低速離心機(jī)角轉(zhuǎn)子 自動脫蓋離心機(jī) 自動脫帽離心機(jī) 檢測離心機(jī) 血型卡專用離心機(jī) 自動平衡離心機(jī) 乳脂離心機(jī) 臺式高速離心機(jī) 高速冷凍離心機(jī) 落地式離心機(jī) 臺式離心機(jī) 高效離心機(jī) 離心機(jī)轉(zhuǎn)頭指南 高速大容量離心機(jī) 微型離心機(jī) 真空離心機(jī) 微波萃取儀 濃縮儀 固相萃取儀 旋轉(zhuǎn)離心機(jī) 高速離心機(jī) 血液離心機(jī) 迷你離心機(jī) 低速離心機(jī) 超速分離系統(tǒng) 冷凍離心機(jī) 離心機(jī) 真空離心濃縮儀 干燥箱/培養(yǎng)箱 秒表/計(jì)時器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 水循環(huán)真空泵 分析天平 PH計(jì) 周邊設(shè)備
介紹PCR儀的兩種定量方法
閱讀：1494 發(fā)布時間：2022-11-11
將熒光基團(tuán)加入到PCR反應(yīng)體系中，通過不斷累積熒光信號從而使對PCR全程的實(shí)時監(jiān)測實(shí)現(xiàn)，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法，即是熒光定量PCR技術(shù)。在實(shí)時熒光定量PCR中，實(shí)時檢測全程PCR擴(kuò)增過程，按照反應(yīng)時間和熒光信號的變化能夠?qū)⒁粭l曲線繪制成。
定量方法
在實(shí)時熒光PCR中，模板的定量包括相對定量和定量2種方法。相對定量是指在一定樣品中靶序列相對于另一參照序列的量的變化。定量通常根據(jù)已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線來使我們所感興趣基因的拷貝數(shù)確定。
1.相對定量法
相對定量法又分為比較Ct值的相對定量法和比較標(biāo)準(zhǔn)曲線的相對定量法兩種方法。
（1）比較Ct值的相對定量法
該方法是同時擴(kuò)增待測靶基因片段和內(nèi)參照基因片段，擴(kuò)增反應(yīng)既能夠在兩個反應(yīng)管中也能夠在一個反應(yīng)管中進(jìn)行，并且通過兩者的ct值的差來測量。在采用此方法過程中，相對量的計(jì)算需要用到數(shù)學(xué)公式。靶基因和內(nèi)源控制物的擴(kuò)增效率大體上相同是該方法的前提。因此應(yīng)用過程中效率的偏移會或多或少影響實(shí)際拷貝數(shù)的估計(jì)。所以，反應(yīng)體系的優(yōu)化的加強(qiáng)是目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率相等的保障。
?。?）比較標(biāo)準(zhǔn)曲線的相對定量法
相對定量法指的是在一定樣本中，靶序列相對于另一參照樣本量變化情況進(jìn)行分析的方法，在使用該方法過程中，參照物必須準(zhǔn)備，因此定量標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制比較容易，只要確定了標(biāo)準(zhǔn)品稀釋度就能夠進(jìn)行對比分析。
2.定量
定量是通過已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出未知樣本的量的方法。該方法，需要對標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度情況進(jìn)行明確，再將標(biāo)準(zhǔn)樣品稀釋。分為幾個不同梯度濃度然后進(jìn)行反應(yīng)測試?？v坐標(biāo)為測得的Ct值，橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)的對數(shù)值，從而將標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制出來，基于標(biāo)準(zhǔn)曲線，在對未知樣品定量分析的過程中樣起始拷貝數(shù)能夠通過ct值被推算出來。