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如何提高磁珠法自動(dòng)核酸提取的提取效率？
現(xiàn)階段，常用的核酸提取法為離心柱純法和磁珠法等，但離心柱純化法效率低，步驟繁瑣。而由于檢測(cè)機(jī)構(gòu)每天需要處理大量樣本，大都是采用自動(dòng)化核酸提取儀配套磁珠法核酸提取試劑盒的方式進(jìn)行核酸提取步驟。應(yīng)用磁珠法的自動(dòng)核酸提取儀操作簡(jiǎn)便，容易自動(dòng)化，是目前市場(chǎng)上的主流。
磁珠法——通過(guò)裂解液裂解細(xì)胞組織樣本，從樣本中游離出來(lái)的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中。利用磁棒吸附攜帶核酸的磁珠移動(dòng)至不同的試劑槽內(nèi)，通過(guò)反復(fù)快速攪拌、混勻液體，經(jīng)過(guò)細(xì)胞裂解、核酸吸附、洗滌與洗脫等步驟，最終得到純凈的核酸。
如何提高核酸提取效率，可以嘗試以下方法：
一、磁珠品質(zhì)要好
首先，磁珠的四氧化三鐵核要能做到真正納米級(jí)，100納米以下；其次,在納米四氧化三鐵表面包裹二氧化硅要均勻密封；三是表面羥基含量要豐富。這樣的磁珠比表面積大，磁響應(yīng)性能強(qiáng)，與核酸的結(jié)合能力與釋放能力都強(qiáng)。
二、裂解液品質(zhì)好
對(duì)于提取胞內(nèi)核酸的應(yīng)用，我們需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解，釋放核酸；當(dāng)裂解不充分時(shí)，釋放的核酸有限，即使磁珠的吸附能力再?gòu)?qiáng)，也很難獲得較高的得率。一般可以通過(guò)提高表面活性劑濃度，來(lái)增強(qiáng)裂解液的裂解能力，表面活性劑能夠破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，促進(jìn)膜蛋白的變性，使得細(xì)胞膜破裂而充分釋放出核酸。
三、洗脫要充分
洗脫不充分有時(shí)候我們裂解結(jié)合液各種條件優(yōu)化到了理想狀態(tài)，可是核酸得率仍然很低。這種情況有可能是磁珠結(jié)合了核酸，但是由于洗脫不充分，磁珠結(jié)合的核酸沒(méi)有被洗脫下來(lái)。一般來(lái)說(shuō)0.5mg的磁珠，洗脫液的體積為70-100ul。