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产品简介
RNA干扰 （RNA interference, RNAi）技术，是将与内源mRNA 编码区同源的小片段（19 -23bp）外源双链 RNA（siRNA）导入细胞中，引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解，从而导致特定基因表达沉默（knock down）的一种实验技术。
详细介绍
siRNA干扰检测服务
原理：RNA干扰 (RNA interference, RNAi)技术，是将与内源mRNA 编码区同源的小片段(19 -23bp)外源双链 RNA(siRNA)导入细胞中，引发细胞中相应mRNA 高效特异性降解，从而导致特定基因表达沉默(knock down)的一种实验技术，其中通过构建表达载体表达siRNA是多种siRNA制备方法中*有可能进行长期基因沉默研究的方法，siRNA 载体可以在细胞内直接转录出shrna ，其干扰效果等同于siRNA ，而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息，包括基因的 mRNA 序列，Genbank Accession No. 和所属物种，本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列，在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体并为您进行后续的干扰实验研究。
实验流程
◇ 选择siRNA表达载体 通过人工合成基因的方法将该序列克隆至Clontech公司的RNAi-Ready pSIREN系列表达载体中，该系列表达载体带有Pol III(U6)启动子，具有转染效率高、操作简单、rna沉默效果易于检测等特点，客户可根据需要进行选择。
◇ 设计siRNA靶序列
◇ 根据客户提交的目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19-21nt 长。
◇ 对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt or 10nt) 相连，形成稳定的发卡RNA，称为 shRNA(short hairpin RNA)。
◇ 合成模板 合成每条编码 shRNA的DNA 模板，并连接到 siRNA 载体相应的多克隆位点之间。连接产物转化DH5α大肠杆菌。
◇ 抽提阳性克隆质粒 公司试剂盒抽提阳性克隆载体并定量。
◇ 转染细胞 质粒直接转染或通过病毒包装后转染细胞，并对转染细胞进行阳性鉴定和转代细胞株的培养。
◇ 干扰效果检测
◇ 基因水平上检测 提取RNA、反转录、Realtime PCR检测干扰效果(客户自备细胞系)。
◇ 蛋白水平上检测 Western Blot检测蛋白水平干扰效果(客户自备一抗)。
服务周期及价格
服务内容 | 价格(￥) | 周期 |
siRNA 载体构建1～3个 | 1800元/个 | 14个工作日 |
siRNA 载体构建3～10个 | 1500元/个 | 20个工作日 |
siRNA 载体构建10个以上 | 询价 | 协商 |
细胞培养、转染 | 5000元/基因 | 1～2周 |
基因水平上检测干扰效果 | 询价（视检测数量商定） | 5～6周 |
蛋白水平上检测干扰效果 | 询价（视检测数量商定） | 5～6周 |
服务说明
◇ siRNA服务需客户与我们共同讨论实验方案，并提供靶基因名称、序列或GeneBank ID和希望插入载体的名称等，免费为您设计siRNA序列。
◇ 由于构建的siRNA表达载体中插入的片段可以形成hairpin结构，因此可能会影响测序。如果我们对质粒测序结果不理想时，将对由质粒扩增得到的PCR产物进行测序。
◇ 开始实验时公司和客户签订详细的实验技术服务合同、保密合同，客户需预付合同金额的50%作为预付款。
提供结果
实验报告包括：siRNA序列、构建载体的测序报告、荧光定量PCR检测报告、Western Blot图片及全部实验数据和详细的实验步骤。