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技術(shù)文章

DNA抽提和純化方法

閱讀:3440          發(fā)布時(shí)間:2017-11-11

DNA抽提和純化方法介紹:

  一、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb

  二、甲酰胺解聚法:破碎細(xì)胞同上,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

  三、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細(xì)胞,將裂解物鋪于乙醇上,然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DAN沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。

  四、異丙醇沉淀法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態(tài))

  五、表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

  六、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然后離心后取上清,可用于PCR反應(yīng)。

  七、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心后取上清,含少量DNA。

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