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所有产品仅供科研使用，不能用于食用和医疗等

小鼠羟脯氨酸（Hyp）酶联免疫酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：                                                           96T
1µg/L -40µg/L 
 
使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中羟脯氨酸（Hyp）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠羟脯氨酸（Hyp）水平。用纯化的小鼠羟脯氨
酸（Hyp）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入羟脯氨酸（Hyp），再
与 HRP 标记的羟脯氨酸（Hyp）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后
加底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄
色。颜色的深浅和样品中的羟脯氨酸（Hyp）呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度
（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠羟脯氨酸（Hyp）浓度。 
试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 
1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  标准品（80µg/L）  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8 条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 张   
6  显色剂 B液  6ml×1/瓶  12  密封袋 1 个
小鼠羟脯氨酸（Hyp）酶联免疫酶联免疫分析试剂盒标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠羟脯氨酸（Hyp）酶联免疫酶联免疫分析试剂盒操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
40µg/L  5 号标准品 150µl的原倍标准品加入 150µl标准品稀释液
20µg/L  4 号标准品 150µl的5 号标准品加入 150µl标准品稀释液
10µg/L  3 号标准品 150µl的4 号标准品加入 150µl标准品稀释液
5µg/L  2 号标准品 150µl的3 号标准品加入 150µl标准品稀释液
2.5µg/L  1 号标准品 150µl的2 号标准品加入 150µl标准品稀释液
 
 
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品 10µl（样品zui终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育 30 分钟。   
4.  配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。 
7.  温育：操作同 3。
8.  洗涤：操作同 5。
9.  显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10.  终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结：
 
 
计算
   以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 
注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔*孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月 
 

 
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