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植物類黃酮檢測(cè)試劑盒的技術(shù)參數(shù)

時(shí)間:2023/12/1閱讀:1011
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 植物類黃酮檢測(cè)試劑盒的技術(shù)參數(shù)

一、測(cè)定意義:

類黃酮是一類多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對(duì)人

體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內(nèi)羥自由基,預(yù)防癌癥

等作用

二、測(cè)定原理:

在堿性亞硝酸鹽溶液中,類黃酮與鋁離子形成在502nm

有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物,測(cè)定樣品提取液在502nm處的吸

光值,即可計(jì)算樣品類黃酮含量。

三、儀器設(shè)備(自備):

烘箱、粉碎儀、研缽、篩子、60%乙醇、離心機(jī)、可見分

光光度計(jì)、60℃震蕩恒溫箱。

四、試劑組成:(50T/48 樣)

提取液:60%乙醇,自備。

試劑一:液體2mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體2mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體25mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:標(biāo)準(zhǔn)品粉劑 1mg×1支,使用時(shí)加入1mL 60%乙醇,

60℃恒溫振蕩10分鐘使其溶解,配成mg/mL

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。

五、操作步驟:

1、類黃酮提?。?/span>

干樣:將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.02g,

加入2mL 提取液,60℃震蕩提取2小時(shí),10000g,室溫

離心10min,取上清,待測(cè)。

鮮樣:將植物用生理鹽水清洗后,將表面水分擦干,剪碎,

液氮研磨成粉狀,稱取約0.05g,加入2mL提取液(含

量低可酌情減少提取液量),60℃震蕩提取2小時(shí),

10000g,室溫離心10min,取上清,待測(cè)。

2、操作表:

 

注:正式實(shí)驗(yàn)前最好取1-2例相對(duì)差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)試,

ΔA測(cè)定大于1時(shí)需要稀釋樣本上清后再測(cè)定。

六、計(jì)算公式:

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:將1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用60%乙醇稀釋成

0.1mg/mL、0.08mg/mL0.06mg/mL、0.04mg/mL、

0.02mg/mL幾個(gè)濃度按操作表標(biāo)準(zhǔn)管及空白管進(jìn)行實(shí)驗(yàn),

得出OD值后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如下:

 

則計(jì)算公式為:

類黃酮含量(mg/g=ΔA測(cè)定-0.0141÷9.0771×提取液總體

積(2mL÷樣本質(zhì)量(g

七、技術(shù)參數(shù):

1、試劑盒檢出限為1μg/mL,如果ΔA測(cè)定值大于1,則需將樣本

上清液作適當(dāng)稀釋以后測(cè)定;

2、本試劑盒回收率可達(dá)95%-100%,穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確性高;

3、標(biāo)準(zhǔn)品配置時(shí)溫度低會(huì)使其溶解緩慢,60℃振蕩溶解時(shí)需

密封好,防止液體溢出造成損失;

4、假如沒有分光光度計(jì),也可用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定,波長不變

(或者在±10nm波動(dòng)范圍內(nèi)選擇)。

 植物類黃酮檢測(cè)試劑盒的技術(shù)參數(shù)


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