1.制備聚丙烯酰胺時(shí)應(yīng)注意排除氣泡。

2.明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。

3.用大梳子。

4.孵育液的PH在7.5-7.6，復(fù)性的TRITON時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)有絮狀物，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)盡量使用新鮮配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中，因?yàn)闀?huì)改變孵育液的PH值，在普通孵箱即可。

6.明膠要4度保存，配好后1周內(nèi)使用。

7.樣本活性低可以延長(zhǎng)孵育時(shí)間到48小時(shí)

MMP檢測(cè)注意事項(xiàng)：細(xì)胞培養(yǎng)基要用無(wú)血清培養(yǎng)基；樣本裂解時(shí)不含EDTA,明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。因?yàn)闄z測(cè)蛋白活性,所以應(yīng)盡量避免蛋白變性,一般都要求冰上操作,電泳也放在冰水里進(jìn)行的。

附上一張明膠酶譜試劑盒的條帶圖

明膠酶譜分析試劑盒操作要領(lǐng)

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明膠酶譜分析試劑盒操作要領(lǐng)

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