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供應(yīng)簡(jiǎn)介

Blasticidin S是一種來自Streptomyces griseochromogenes的核苷肽類抗生素，通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核生物的蛋白質(zhì)合成。Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品信息（Invivogen原裝，現(xiàn)貨供應(yīng)）：

貨號(hào)	名稱	產(chǎn)地	規(guī)格	報(bào)價(jià)	*（元）	庫(kù)存
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg	598	598	是
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg*2	1050	1050	是
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg*5	2310	2150	是
ant-bl-5	Blasticidin S 殺稻瘟菌素S 滅瘟素（濃度10mg/1ml）	Invivogen	10mg*10	4200	3700	是

作用機(jī)理：

Blasticidin S是一種來自Streptomyces griseochromogenes的核苷肽類抗生素，通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核生物的蛋白質(zhì)合成。Blasticidin S用于篩選攜帶有bsr或BSD耐受基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。殺稻瘟菌素具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導(dǎo)致細(xì)胞迅速死亡。

基本信息：

CAS：3513-03-9分子式: C₁₇H₂₆N₈O₅, 1 HCl 純度：>95%（HPLC）

分子量: 458.90 濃度：10 mg/ml in HEPES 緩沖液，pH 7.5

結(jié)構(gòu):

抗性基因：

目前經(jīng)克隆和測(cè)序的殺稻瘟菌素耐受基因有3種，一種是分離自產(chǎn)生菌Streptoverticillum sp.的乙酰基轉(zhuǎn)移酶基因bls，另外兩種是脫氨酶基因，包括為從Bacillus cereus 中分離的bsr和從Aspergillus terreus 中分離的BSD 基因。bsr和 BSD基因是zui主要的選擇性標(biāo)記基因，用于哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，也可以用于E.Coli中。

應(yīng)用濃度：

1）Escherichia coli（推薦濃度：25-100 µg/ml）

E. coli對(duì)Blasticidin S的敏感性稍差，轉(zhuǎn)化子對(duì)Blasticidin S具有耐受性，可以用低鹽LB培養(yǎng)基（pH 8）進(jìn)行篩選，添加100 μg/ml Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S的活性。推薦使用InvivoGens Fast-Media®Blas以獲得結(jié)果。

2）哺乳動(dòng)物細(xì)胞（推薦濃度：1-50 µg/ml）

哺乳動(dòng)物細(xì)胞中Blasticidin S的工作濃度范圍在1-50 μg/ml。初次實(shí)驗(yàn)建議通過滅殺曲線來確定*使用濃度。

一些哺乳動(dòng)物細(xì)胞的建議工作濃度：

細(xì)胞	種屬	組織	培養(yǎng)基	Blasticidin S Concentration（μg/ml）
HeLa	Human	Uterus	DMEM	3-10
293	Human	Kidney	DMEM	3-10
B16	Mouse	Melanoma	RPMI	3-10
PC1.0	Hamster	Adenocarcinoma	RPMI	10-30

操作步驟（哺乳動(dòng)物穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選）：

Blasticidin S通常使用濃度為10 μg/ml。攜帶bsr或BSD基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，在含有Blasticidin S的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基中孵育，用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

（1）轉(zhuǎn)染后48h，用含有適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基將細(xì)胞傳代；（注：細(xì)胞處于活躍分裂期時(shí)抗生素工作。細(xì)胞密度太高，抗生素效率降低。細(xì)胞分盤時(shí)覆蓋率不超過25%）

（2）每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含抗生素的新鮮培養(yǎng)基；

（3）7天后檢測(cè)細(xì)胞集落形成。根據(jù)宿主細(xì)胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要再增加一周或更久。

（4）轉(zhuǎn)移5-10個(gè)耐受克隆到35mm細(xì)胞盤中。加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

Invivogen Blasticidin S的應(yīng)用和具體濃度：

物種	細(xì)胞系/株	載體/質(zhì)粒	Blasticidin S Concentration （μg/ml）
E. coli	MIC128	pHASH102	250
B.subtilis	RM125	pGETS109	500
P. falciparum	3D7/GC03 parasites	pLN-ACP-V5	2.5
Dictyosium discoideum	DAip1-null	pBsr2	10
Rat	NIH3T3	pcDNA6.2	5
Human	HeLa	pEF-BOS	2
Human	LLCMK2	SeVdp	5
Human	293	pOG44	15
Mouse	B16	pCMVβ	50
Mouse	B16	pBLAST	50

另Invivogen提供攜帶bsr基因的質(zhì)粒產(chǎn)品：

質(zhì)粒名稱	抗性基因	貨號(hào)	規(guī)格	產(chǎn)地
pSELECT-blasti-mcs	bsr	psetb-mcs	20 μg	invivogen
pSELECT-blasti-LacZ	bsr	psetb-lacz	20μg	invivogen
pMONO-blasti-mcs	bsr	pmonob-mcs	20μg	invivogen
pMONO-blasti-gfp	bsr	pmonob-gfp	20μg	invivogen
pVITRO1-blasti-mcs	bsr	pvitro1-bmcs	20μg	invivogen
pVITRO1-blasti-GFP/LacZ	bsr	pvitro1-bgfplacz	20 μg	invivogen
pVITRO2-blasti-mcs	bsr	pvitro2-bmcs	20μg	invivogen
pVITRO2-blasti-GFP/LacZ	bsr	pvitro2-bgfplacz	20μg	invivogen
psiRNA-h7SKblasti G1 Kit	bsr	ksirna3-b21	1 Kit	invivogen
pCpGfree-vitroBmcs	bsr	pcpgvtb-mcsg2	20μg	invivogen
pCpGfree-vitroB	bsr	pcpgvtb-lz	20μg	invivogen

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