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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40735ES75 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業(yè) |
產品介紹
HB180502
FITC標記鬼筆環(huán)肽（FITC Phalloidin）
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 外觀 | 儲存 | 價格（元） | * |
FITC標記鬼筆環(huán)肽（FITC Phalloidin） | 40735ES75 | 300T | 液體 | -20℃避光保存 | 1533.00 | 785.00 |
40735ES80 | 1mg | 凍干粉 | -20℃避光保存 | 6456.00 | 6456.00 |
背景描述
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin，而不會與單體肌動蛋白G-actin結合，通常用來標記組織切片，細胞培養(yǎng)物或無細胞體系中的F-actin，從而對F-actin進行定性和定量分析。另外，鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維，無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞，按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環(huán)肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略，染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識度非常明顯。因此，鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動蛋白（Actin）抗體進行相關研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15?，分子量＜2000 Daltons，未標記肌動蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如，同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白，原肌球蛋白，DNase I等仍能發(fā)生反應；鬼筆環(huán)肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質；以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結構，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為FITC標記的鬼筆環(huán)肽，染色反應特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外，經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性，適用性廣泛。
我司分別提供凍干粉形式（貨號：40735ES80）和儲存液形式（貨號：40735ES75，濃度為20µM）的FITC標記鬼筆環(huán)肽，用戶根據(jù)自身需求選擇。建議使用濃度為80~200nM。
產品性質
分子式（Molecular Formula） | C56H60N10O15S2 |
分子量（Molecular Weight） | 1177.3 |
///大激發(fā)/發(fā)射波長（Ex/Em） | 495~496/513~516nm |
多肽序列（Sequence） | FITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6) |
外觀（Appearance） | 黃色粉末（凍干粉） |
溶解性（Solubility） | 溶于DMSO、DMF、甲醇或者乙腈水溶液（20%） |
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃避光干燥保存，1年有效。
注意事項
鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對人的半數(shù)致死劑量LD50約2mg/kg）。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
需要自備材料
（可選）甲醇
1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細胞培養(yǎng)級別（貨號：60145ES76）
固定液4%多聚甲醛（溶于PBS緩沖液）（貨號：36314ES60）
丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含DAPI）（貨號：36307ES08），DAPI（貨號：40727ES10）
（可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含DAPI）（貨號：36307ES08）
（可選）BSA，標準級別（貨號：36101ES25）
載玻片和蓋玻片
蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
組裝有FITC激發(fā)/發(fā)射濾片，以及DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡
操作步驟
工作液準備
對于FITC標記鬼筆環(huán)肽（貨號：40735ES75，300T）
本品以溶于甲醇的20µM儲存液形式提供，總量為300µL。按照100nM的工作液濃度來換算，可制備總量為60mL的工作液。建議收到產品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
對于FITC標記鬼筆環(huán)肽（貨號：40735ES80，1mg）
本品以凍干粉形式提供，分子量為1177.3，總量為1mg?？上扔眉状蓟蛘逥MSO充分溶解配制成20~100µM的儲存液。如，加入8.494mL甲醇到1mg鬼筆環(huán)肽即得到100µM等量的儲存液，根據(jù)單次使用量，進行小量分裝，-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。
開始實驗前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為：80~200nM。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
染色步驟
細胞爬片生長24h，使其密度達到50%匯合度。
吸掉培養(yǎng)液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。
使用溶于PBS的4%甲-醛溶液進行細胞固定，室溫固定10min。
注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。
室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。
室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min。
室溫條件下，用PBS清洗細胞2~3次，每次10min。
取200µL配制好的 FITC標記鬼筆環(huán)肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細胞，室溫避光孵育30min（通常情況下，4℃~37℃孵育皆可）。
注意：為了降低背景，可于FITC標記的鬼筆環(huán)肽工作液內加入1% BSA；另外，孵育過程中為了避免溶液揮發(fā)，可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。
用PBS清洗蓋玻片3次，每次5min。
使用200µL DAPI溶液（濃度：100 nM）對細胞核進行復染，約30s。
用PBS清洗蓋玻片，然后倒置在已經滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑，然后用指甲油*封片。此法制備的標本玻片可置于4℃避光保存，通常6個月內可繼續(xù)做F-actin染色分析。
注意：也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑（貨號：36308ES11）合并步驟9）10），簡化步驟。
熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察，選擇FITC激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=496/516nm）和DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。
