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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 货号 | 40710ES03 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 生物产业,制药/生物制药 |
产品介绍
碘化丙啶染液 PI(Propidium Iodide)(1mg/mL)
产品描述
碘化丙啶染液 PI(Propidium Iodide)(1mg/mL)是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。水溶液中PI的zui大激发/发射波长是493/636nm。一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，zui大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，zui大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其zui大激发/发射波长变为535/617nm。PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。
PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。PI的单独染色也可以进行细胞周期的检测。
本品是溶于水的PI储存液，浓度为1mg/ml，只需用合适的缓冲液稀释到工作液即可。
产品性质
英文同义名（English synonym） | 2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide. |
CAS号（CAS NO.） | 25535-16-4 |
分子式（Formula） | C27H34I2N4 |
分子量（Molecular Weight） | 668.4 |
纯度（Purity） | ≥95% by HPLC |
溶解性（Solubility） | 溶于水（1mg/ml） |
荧光光谱 （Fluorescence Spectral） | 水溶液，PI的Ex/Em= 493/636nm；PI-核酸的Ex/Em= 535/617nm；荧光可用氙气灯，泵弧灯或者488nm氩离子激光激发。通常情况下，用流式细胞仪的FL2通道检测。 |
结构式（Structure） |
|
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。4 oC避光保存，至少6个月稳定。
使用方法
贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）
样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。
RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；b，将本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；c，用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1min。
复染：a，于2X SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；b，直接用2×SSC稀释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。c，2×SSC清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片（比如Yeasen，货号：36308ES08）。d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
悬浮细胞复染步骤（流式细胞仪检测）
样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤：
收集一定量的细胞，密度约 2 × 105 ~1 × 106。离心收集细胞，吸掉上清液，用手轻弹管壁就剩下
的液体重悬细胞。之后加入1ml常温存放的PBS；
将所有的重悬细胞转移到4ml于-20oC预冷的无水乙醇，在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添
加细胞悬液到乙醇内。于-20oC乙醇中固定5-15min。
离心收集细胞，除去乙醇。用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入5ml室温的PBS。允许细胞水化15min；
复染
用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀
释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1ml的PI染色液足够用于每个细胞样本的检测。注：工作液的使用浓度可以根据自身实验体系调整，也可以直接使用PBS，HBSS等缓冲液直接稀释PI储存液到需要的浓度。
样本制备的zui后一步后离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入1ml的PI染
色工作液。室温孵育15min后，流式细胞仪进行细胞分析。若用流式显微镜观察，则需要离心样本，去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取1滴悬液到载玻片上，盖上盖玻片后观察。
染色质FISH复染步骤
样本准备：根据标准步骤制备样本。复染之前的zui后一步用去离子水清洗样本以去除玻片上残留的缓冲盐。室温晾干。此步骤有助于减少非特异性的背景染色。
复染
工作液的配制：用PBS缓冲液直接稀释1 mg/ml（1.5 mM）的PI储存液1:1000，得到1.5 µM的
PI染色工作液。滴加300µL的工作液直接到样本。有必要的话，工作液内加入新鲜制备的RNase A（终浓度：10 µg/mL）。可使用塑料盖玻片均匀分布染液在载玻片上。室温避光条件下孵育样本30 min；如果加入RNase则37oC孵育。
去除盖玻片，用PBS或去离子水清洗以除去没有结合的染料；
用吸水纸巾围绕着样本周围吸取残留液体，盖上玻璃盖玻片后用石蜡或者指甲油封住盖玻片边缘。也可用抗荧光淬灭剂进行封片。
- 选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
注意事项
碘化丙啶（PI）是已知的诱变剂，因此PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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