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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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背 景：
活體成像技術(shù)（optical in vivo imaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù)，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動(dòng)物體內(nèi)，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng)，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)光強(qiáng)度，間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，zui常用的有腫瘤或疾病動(dòng)物模型的建立，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究、干細(xì)胞研究、蛋白質(zhì)相互作用研究等。
原 理：
常見(jiàn)的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲(chóng)熒光素酶（firefly luciferase，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin，后者的底物是Coelenterazine。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長(zhǎng)不同），當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。
Coelenterazine腔腸熒光素
美國(guó)YEASEN提供三種coelenterazine類(lèi)似物，分別是Coelenterazine，Coelenterazineh，Coelenterazine 400a。雖然三種都可用于相同實(shí)驗(yàn)，但是得到的結(jié)果有差異。
Coelenterazine：普遍認(rèn)為是天然的腔腸熒光素，是海腎熒光素酶（Rluc）的作用底物，具有許多用途?？捎糜跈z測(cè)活細(xì)胞中鈣離子濃度，基因報(bào)告分析，BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）研究，ELISA，HTS，組織或細(xì)胞中超氧陰離子和過(guò)亞硝酸鹽的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。
Coelenterazine h:與Renilla熒光素酶或Gaussia熒光素酶使用具有一定的局限性。體外研究中比其他類(lèi)似物更適合與鈣離子激活發(fā)光蛋白共用。據(jù)報(bào)道，Coelenterazine h的發(fā)光強(qiáng)度高于天然腔腸熒光素10-20倍，因此是用來(lái)檢測(cè)鈣離子濃度微小變化的有力工具。
Coelenterazine 400a: 是BRET研究中Rluc的底物，此腔腸素衍生物在390 nm和400nm之間發(fā)藍(lán)色光，對(duì)GFP acceptor的光發(fā)射干擾zui小。
（1）Coelenterazine（天然腔腸熒光素）
分子式：C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol 純度：95% 保存：-15°C避光，保存在惰性氣體下
Protocol：發(fā)光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
1）使用管光度計(jì)室溫下定量檢測(cè)發(fā)光情況，每個(gè)樣品做三個(gè)平行；
2）加入底物10s內(nèi)立即檢測(cè)，“integration time”為1 s；
3）對(duì)于細(xì)菌表達(dá)Gluc系統(tǒng)，甲醇溶解底物腔腸素制備10 mM儲(chǔ)存液，終濃度為10μmol/L。儲(chǔ)存液-20 °C保存，工作液制備過(guò)程需避光并置于冰上。
（2）Coelenterazine 400 a/腔腸素400a
分子式：C26H21N3O 分子量：: 391.48 g/mol 純度：95%
儲(chǔ)存液制備：
1）開(kāi)封前將瓶子放到室溫溫育，以避免產(chǎn)品發(fā)生任何的冷凝；
2）用125 μL無(wú)水乙醇溶解50 μg Coelenterazine 400 a，zui終濃度是0.4μg/μL. ，輕輕混勻；（注：避免用DMSO或其他溶劑來(lái)溶解腔腸素400a，因?yàn)樵噭┛赡鼙谎趸?/span>
3）分裝后避光保存在-20°C，保持干燥；
（3）Coelenterazine h/ 腔腸素h（from Caliper LifeScience Inc.）
RediJectCoelenterazineh為即用的注射型生物發(fā)光底物，特別設(shè)計(jì)用于體內(nèi)成像研究。通過(guò)zui小化產(chǎn)品成分的變化，zui小化凍融次數(shù)和嚴(yán)格控制不同批次的產(chǎn)品，使用Caliper公司的Coelenterazine h能確?？蛻?hù)得到高重復(fù)性的結(jié)果。
優(yōu) 點(diǎn)：
◆預(yù)制配方，不同批次間嚴(yán)格控制特別設(shè)計(jì)用于體內(nèi)研究；
◆即用型產(chǎn)品通過(guò)zui小化預(yù)成像準(zhǔn)備步驟，減少時(shí)間和精力；
◆每瓶可用于5只動(dòng)物的成像研究；（10 瓶/kit）
◆經(jīng)IVIS成像系統(tǒng)驗(yàn)證，控制體內(nèi)成像質(zhì)量；
顏色：黃色溶液（溶于丙二醇/檸檬酸鹽）
濃度：150 μg/mL （10瓶無(wú)菌溶液，每瓶含1.2 mL濃度為150 μg/mL的Coelenterazine h ）
保存： Store at ≤ -70 °C。
使用及注射劑量：
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，37 °C水浴鍋解凍，避免重復(fù)凍融。靜脈注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)。
1. 靜脈注射：推薦使用劑量15 μg/mouse(100 μL/mouse），用1 ml注射器直接從瓶?jī)?nèi)吸取溶液，然后用25 gauge或更高的針頭注射入小鼠體內(nèi)。盡快成像檢測(cè)以獲得峰值信號(hào)。
2. 腹腔注射：推薦劑量是30 μg/mouse (200 μL/mouse)，方法同上。
應(yīng)用實(shí)例：
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產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
40904ES03 | Coelenterazine天然腔腸熒光素 | 1mg | 1800.00 |
40904ES08 | Coelenterazine天然腔腸熒光素 | 5mg | 3600.00 |
40904ES10 | Coelenterazine天然腔腸熒光素 | 10mg | 4500.00 |
40905ES03 | Coelenterazine 400 a/腔腸素 400a | 1mg | 2080.00 |
40905ES08 | Coelenterazine 400 a/腔腸素 400a | 5mg | 6280.00 |
40905ES10 | Coelenterazine 400 a/腔腸素 400a | 10mg | 10760.00 |
40906ES03 | Coelenterazine h/ 腔腸素h | 1mg | 5145.00 |
40907ES01 | Rediject Coelenterazine h | 1 kit | 4863.00 |
