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多重PCR(multiplex Polymerase Chain Reaction,mPCR)也称复合PCR,由Chambehian'于1988年提出。其基本原理与常规PCR相同,区别在于多重PCR反应体系加入一对以上引物,各对引物分别结合在模板相对应部位,最终扩增出一条以上目的DNA片段。而多重PCR建库技术是一种整合多重PCR及高通量测序的靶向测序技术。该方法具有成本低、检测效率高、应用灵活、适应性广等特点,在病原微生物检测、遗传病/肿瘤突变检测、植物分子育种等研究中都有广泛的应用。
多重PCR建库技术一览
多重PCR建库技术在微生物检测中的应用
病原tNGS
微生物多样性检测
16S rRNA扩增子测序技术是微生物群落多样性检测常用的组学技术之一,该技术无需对微生物分离培养,直接提取样本里面所有微生物的基因组,利用合适的通用引物扩增16S rDNA/18S rDNA /ITS等高变区或其他功能基因,采用高通量测序仪Miseq、Hiseq或Novaseq对其进行测序,通过生物信息学分析可以获得特定实验样品中细菌、真菌或古菌等的物种组成、物种丰度、系统进化、群落比较等诸多信息。
多重PCR建库技术在动植物检测中的应用
品种鉴定
植物分子育种
在传统植物育种中,遗传变异是通过视觉选择进行鉴定。随着分子生物学的发展,分子标记辅助育种解决了传统利用表型筛选的作物育种方式成本高,周期长,费时费力的问题,逐步从“经验育种"走向“精确育种"?;诙嘀豍CR和基于目标区域基因组序列液相捕获精准定位SNP/INDEL基因型分型测序技术,将位点选择高灵活性、样品数量灵活性、高通量、高灵敏度、低成本多项优势有效结合,实现对全基因组上特定基因位点变异的高通量靶向筛查。
遗传多样性分析
多重PCR靶向捕获测序可用于对植物种群中的遗传多样性进行分析。通过选择性引物捕获特定基因组区域并对多个样本进行测序比较,可以研究不同品种或种群中的遗传差异和多态性,为植物种质资源的?;ず屠锰峁┲匾姆肿颖昙切畔ⅰ?/span>
动植物病虫害检测
多重PCR技术可以针对多种植物病原真菌、细菌、病毒、线虫等进行靶向检测,对病害的流行预警、溯源和防控管理等具有重要作用。
多重PCR建库技术在疾病研究及相关检测中的应用
遗传病检测
肿瘤基因检测
临床肿瘤基因检测主要有家族遗传性肿瘤检测(检测胚系基因突变)、肿瘤组织体细胞基因突变检测(肿瘤分子分型、用药指导等)、游离DNA基因突变检测(肿瘤动态监测,耐药评估等),肿瘤样本靶向NGS分析的建库方法主要有两种:杂交捕获法和扩增法。泛生子一步法扩增建库技术(中国发明ZL201710218529.4),利用特定引物通过一步PCR扩增,结合生物信息算法分析,可检测多种类型的变异信息,包括点突变、小片段插入/缺失、拷贝数变异、基因融合变异、甲基化修饰和RNA表达量变化等。除用于多种靶向药基因突变进行同时鉴定以指导用药之外,对于微量DNA信号的特异性放大能力在cfDNA检测及血液肿瘤治疗后微小残留?。∕RD)的鉴定等领域也具有极大的优势。
多重PCR建库技术多领域赋能,满足不同应用的检测需求。翌圣多款多重PCR建库产品满足众多客户的不同需求,助力多重PCR建库技术大显身手!
应用 | 产品类别 | 产品名称 | 货号 | 备注 |
病原tNGS | 逆转录 | Hieff NGS® 1st Strand Synthesis Kit | 12249ES | 常规逆转录 |
Hieff NGS® 1st Strand Synthesis Mix | 12958ES | 逆转录预混液 | ||
多重PCR预混液 | 4×Hieff® Multiplex PCR Master Mix | 12948ES | - | |
一步法RT-PCR | Hieff® Multiplex RT-PCR Kit | 12950ES | - | |
微生物检测 | 16S 检测 | 16S(V3-V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina | 12983ES | 16S V3-V4 |
Hieff NGS® Multiplex Long PCR Master Mix | 17228ES | 16S全长扩增 | ||
遗传病检测 | 多重扩增预混液 | 2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR预混液 | 13283ES | - |
分子育种检测 | 多重扩增预混液 | 2×Hieff® C2P4 Blood Direct Multiplex PCR Master Mix | 13606ES | - |
肿瘤突变检测 | 多重扩增预混液 | 5× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液 (for multiplex PCR) | 10137ES | - |