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想快速區(qū)分不同胰蛋白酶？這三點(diǎn)是關(guān)鍵！
胰蛋白酶
理化性質(zhì)
胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，通過多重結(jié)晶方式純化，并進(jìn)一步采取層析及超濾技術(shù)制備而得。該酶易溶于水，不溶于、乙醇、等有機(jī)溶劑。在pH1.8時(shí)，酶短時(shí)間煮沸幾乎不失活，在堿溶液中加熱則會(huì)變性沉淀。Ca2+對(duì)酶有保護(hù)和激活作用，胰蛋白酶的等電點(diǎn)為pH10.1。胰蛋白酶作為肽鏈內(nèi)切酶，對(duì)精氨酸和賴氨酸肽鏈具有選擇性水解作用。早期的胰蛋白酶在生物制藥領(lǐng)域的主要應(yīng)用是胰島素的生產(chǎn)，很快也在其他細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域應(yīng)用起來。動(dòng)物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同細(xì)胞加入的酶濃度不一樣。
應(yīng)用范圍
胰島素、滅活疫苗生產(chǎn)
組織細(xì)胞分離及培養(yǎng)
臨床外科使用
食品行業(yè)加工助劑
重組胰蛋白酶
理化性質(zhì)
重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶，具有穩(wěn)定性好、純度高、無動(dòng)物來源的優(yōu)點(diǎn)。市場(chǎng)主流的重組胰蛋白酶是利用DNA重組技術(shù)在大腸桿菌或酵母中表達(dá)的重組豬胰蛋白酶，其氨基酸序列與豬胰蛋白酶一致，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。其由223個(gè)氨基酸構(gòu)成，含有6對(duì)二硫鍵。該酶包含兩種胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF和TLCK等、金屬離子螯合劑如EDTA等的抑制。重組胰酶用于無血清培養(yǎng)，同胰蛋白酶一樣，不同細(xì)胞加入的酶濃度不一樣。
應(yīng)用范圍
疫苗和重組胰島素生產(chǎn)
細(xì)胞分析的組織樣本制備
免疫細(xì)胞治療
生物藥物生產(chǎn)
蛋白質(zhì)序列、結(jié)構(gòu)及組學(xué)研究
分類 | 胰蛋白酶 | 重組胰蛋白酶 | 重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級(jí)） |
來源 | 取自牛、豬、羊的胰臟 | 大腸桿菌或酵母重組表達(dá) | 畢赤酵母重組表達(dá) |
安全性 | 潛在病原污染 | 無外源性病毒污染 | 無外源性病毒污染 |
純度 | 1：250胰蛋白酶溶液中90%以上為雜質(zhì) | 高純度（β-trypsin≥70%， α-trypsin≤20%） | 高純度（β-trypsin>80%， α-trypsin<20%） |
糜蛋白酶 | 每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。 | 無糜蛋白酶等雜酶污染 | 無糜蛋白酶等雜酶污染 |
比活 | / | ≥3800 USP units/mg 蛋白 | >6800 USP units/mg蛋白 |
消化效果 | 不穩(wěn)定 | 消化能力強(qiáng)，酶用量少 | 消化能力強(qiáng)，酶用量少 |
自切率 | 容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果 | 容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果 | 經(jīng)過特殊處理保證其不自切 |
Maarof Manira[1]等人研究了不同胰酶對(duì)皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的影響。在這項(xiàng)研究中，全層人皮膚經(jīng)過膠原酶消化后釋放成纖維細(xì)胞，分別使用胰蛋白酶EDTA溶液（TE）和重組胰蛋白酶溶液（TS）處理細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞的培養(yǎng)擴(kuò)增過程中，用TE或TS處理的人角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的總細(xì)胞產(chǎn)量相當(dāng)（見圖1）；通過定量RT- PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法（ICC）分析TE和TS對(duì)I型膠原（Col-I）、III型膠原（Col-III）、細(xì)胞角蛋白10（CK10）和細(xì)胞角蛋白14（CK14）的基因和蛋白表達(dá)水平影響，發(fā)現(xiàn)與TE相比，TS除Col-III外的皮膚特異性基因表達(dá)更高，蛋白表達(dá)水平相似（見圖2,4）。研究數(shù)據(jù)反饋，重組胰蛋白酶（TS）表現(xiàn)出更溫和的消化效果，能夠保持高細(xì)胞活力和細(xì)胞產(chǎn)量。
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），無酚紅 | 40123ES60 | 100 mL |
PerfCell™ Trypsin-no EDTA (0.25%), no phenol red 胰酶-無EDTA溶液（0.25%），無酚紅 | 40124ES60 | 100 mL |
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液（0.25%），含酚紅 | 40126ES60 | 100 mL |
PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚紅 | 40127ES60 | 100 mL |
Trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末) | 40101ES25 | 25 g |
PerfCell™ Recombinant Trypsin（powder）重組胰蛋白酶（粉末） | 40512ES10/60 | 10 mg/100 mg |
Recombinant Trypsin（MS-SAFE）重組胰蛋白酶（質(zhì)譜級(jí)） | 20416ES60 | 100 µg |
PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，含酚紅 | 40134ES60 | 100 mL |
PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，無酚紅 | 40135ES60 | 100 mL |
參考文獻(xiàn)：
[1]Manira M, Khairul Anuar K, Seet WT, Ahmad Irfan AW, Ng MH, Chua KH, Mohd Heikal MY, Aminuddin BS, Ruszymah BH. Comparison of the effects between animal-derived trypsin and recombinant trypsin on human skin cells proliferation, gene and protein expression. Cell Tissue Bank. 2014 Mar;15(1):41-9.
