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通用型 DNA 损伤彗星银染检测试剂盒产品说明书
阅读：1758 发布时间：2021-9-8| 提 供 商 | 上海哈灵生物科技有限公司 | 资料大小 | 142.9KB |
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主要用途
通用型 DNA 损伤彗星银染检测试剂是一种旨在采用组织细胞碱性凝胶电泳，在电场环境下，损伤变性的 DNA 片段迁移形成特定的形态，即 DNA 移动尾巴，来进行体外评价和半定量分析 DNA 损伤程度的 而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于新鲜动物细胞、组织、血液、骨髓 等样品的 DNA 损伤研究，包括 DNA 链断裂、氧化性碱基损伤、DNA 剪切损伤、DNA 交联、DNA 修复等， 应用于环境和药物毒理学、放射学、氧化应急反应等研究。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，操作简 便，重复一致。
技术背景
彗星检测技术（Comet assay），又称为单细胞凝胶电泳检测技术（single cell gel electrophoresis assay；SCGE） 或微凝胶电泳检测技术（microgel electrophoresis assay），是基于变性切离的DNA片段，在电场的影响下， 从细胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在细胞核内。通过凝胶电泳，呈现出分子迁移图形， 形成彗星拖尾（comet tail）现象，即完整DNA的细胞染色体为“头"，而松散和断裂的DNA为“尾"，以此评 价DNA损伤程度。这是分析单一细胞DNA链断裂的敏感方法之一。其技术方法的基本步骤是：第一，细胞 固定包埋在凝胶里；第二，细胞裂解处理；第三，DNA变性处理；第四，电泳迁移；第五，染色和图像分 析。由此观察DNA迁移形态，进行体外检测，成为细胞DNA损伤研究的基本手段。其中电泳条件将决定检 测的敏感程度。碱性电泳（alkaline electrophoresis）为常规电泳检测，可以检测单链DNA断裂、双链DNA 断裂、大部分无嘌呤核酸位点（apurinic site）和无嘧啶核酸位点（apyrimidic site）、碱不稳定DNA结合物 （alkali-labile DNA adduct）等DNA损伤。
用户自备 无离子水：用于稀释电泳缓冲液 磨砂载玻片和盖玻片：用于放置样品进行微凝胶电泳的器材 电泳槽：用于微凝胶电泳的装置 恒温培养箱或恒温水槽：用于孵育反应 1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器 90 mm 培养皿：用于样品处理、染色等的容器 光学显微镜：用于观察细胞彗星现象
注意事项 1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 整个操作，建议在暗光下进行 4． 建议使用新鲜培养的动物细胞、组织、血液等；细胞量为 105细胞/毫升 5． 可以使用 100 微摩尔过氧化氢或 25 微摩尔高锰酸钾冰上孵育 10 分钟预处理样品作为阳性对照 6． 电泳液（Reagent E）： 10 倍浓度为 3 摩尔 NaOH，10 毫摩尔 EDTA，pH 13.5 7． 净化液（Reagent F）： 70%ETHANOL 8． 操作时小心轻柔，避免胶体脱位 9． 电泳温度过高，会造成胶体脱位5 10．电泳时，电压 25 伏为佳，建议控制电泳液量达到要求 11．细胞 DNA 损伤彗星图像如下（400 倍）